Acuk lueel wënthɛɛr lɔn ye pïu ë guɔ̈p ë raan ëbɛ̈n yök ke tɔ̈ piiny tënë kɔc tuany ë liver fibrosis. Në ye puɔ̈ɔ̈c kënë yic, ɣok acï wël cï kek gɔ̈t ku DNA methylome në liver yiic ya thiëëc yiic në ruääiden kenë IPA tɔ̈ në rim yiic, ku jɔl ya luɔɔi de IPA në gël de kä ye röt looi në rim yiic (HSCs) në vitro yic.
Kuɛ̈n acï kɔc tuany dït apɛi 116 yök ke cïn tuany ë nhom ë 2 (T2DM) (run 46.8 ± 9.3 run; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m2) cï keek tɔ̈ɔ̈u ë nhom dït ë nhom ë Kuopio (KOBS). Kä ye IPA cath në pïu yiic aye kek them në pïu yiic (LC-MS), ku thëm de kä cï kek gɔ̈t në liver yic aacï kek bɛ̈n ya them në thëm de RNA, ku thëm de DNA acï ya looi në luɔɔi de BeadChip. Kä ye yök në nhom de raan yic (LX-2) aake cï kek ya luɔ̈ɔ̈i në luɔɔi de kä ye kek them në vitro yic.
Aciëŋ de IPA në rim yiic ee thiääk kenë tɛ̈n yenë genes röt luɔɔi thïn në thɛɛr ke pïïr yiic, pïïr de raan yic, ku jɔl ya pïïr bääric në liver yic. AKT ë 1 (AKT1) yenëka ye lac yök ku ye lac yök në liver yic ku jɔl ya DNA yic. Tɛ̈ yenë IPA töök thïn ee apoptosis cɔk loi rot, ee wëëi de käm cɔk tɔ̈ piiny, ku ye pïïr de raan cɔk riääk ku jɔl ya tɛ̈n yenë käŋ röt luɔɔi thïn në tɛ̈n yenë käŋ röt luɔɔi thïn në tɛ̈n yenë käŋ röt luɔɔi thïn në luɔɔiden yic, ku jɔl ya pïïr de raan cɔl LX-2.
Na cï kek lööm nëtök, ke wël käkë aye kɔc kuɔny në IPA yic ku ka lëu bïk apoptosis ya cɔk loi rot ku bïk HSC ya cɔk lɔ të cïï lui thïn, ku kän ee lëu bï liver fibrosis ya gël në luɔɔiden yic ku jɔl ya luɔɔi de mitochondrial.
Tɛ̈n ë dït de guɔ̈p ku tuany ë nhom acï thiääk kenë dït de tuany ë nhom ë nhom (MASLD); tuany ee 25% agut cï 30% de kɔc ëbɛ̈n dɔm [1]. Kë tueeŋ ye yök në MASLD yic ee tɔ̈ɔ̈k de liver, man ye luɔɔi dït apɛi ye ŋic në tɔ̈ɔ̈u de liver (ECM) [2]. Kä tueeŋ ye tɔ̈ në liver fibrosis yic aye kä ye tɔ̈ në liver yic (HSCs), man ye käŋ kaaŋuan ŋic kek nyuɔɔth: kä ye lac tɔ̈, kä ye luui, kä cïï luui, ku kä ye lac thök [3, 4]. HSCs alëu bïk ya luui ku bïk ya tek thook në kä ye röt lac looi yiic agokë ya cil apath ku bïk ya naŋ riɛl dït apɛi ye kek wïc, ku bïk ya juak në α-SMA yic ku jɔl ya Col-I [5, 6]. Në thɛɛr yenë liver rot dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n, ke HSCs cï kek ya luui aye kek nyaai në apoptosis yic ka bïk cië ye bɛɛr luui. Käk aye yen mat thïn ëbën agut cï gël de kä ye röt looi në pïïr yic (cïmën de NF-κB ku jɔl ya PI3K/Akt yenë käŋ nyuɔɔth) [7, 8], ku jɔl ya tɛ̈n yenë käŋ röt waar thïn ku jɔl ya luɔɔiden [9].
Kä ye tɔ̈ në pïu yiic ke pïu yiic, ye kek looi në pïu yiic, acï kek ya yök ke cï röt dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n në tuanytuɛɛny ke pïu yiic agut cï MASLD [10–13]. IPA ee thiääk kenë mïïth ye cam në mïïth yiic, ku ka nyic në mïïth yiic ku ye mïïth yiic gël në tuanytuɛɛny yiic, ku ye mïïth yiic cɔk tɔ̈ ke cïn miääu (NASH) ye tɔ̈ në vivo yic ku në vitro yic [11–14]. Kä kɔ̈k ye nyuɔɔth aye bɛ̈n bei në kuɛ̈n thɛɛr cï looi yic, cï nyuɔɔth lɔn ye IPA tɔ̈ në rim yiic tɔ̈ piiny tënë kɔc tuany nɔŋ gup ë thɛ̈mthɛ̈m awär kɔc tuany ë thɛ̈mthɛ̈m cïn gup ë thɛ̈mthɛ̈m në kuɛ̈n de Kuopio Bariatric Surgery (KOBS). Ku në thɛɛr kɔ̈k yiic, ɣok acï nyuɔɔth ke töök de IPA alëu bï tɔ̈c de genes ye tɔ̈ ke ye kä ye rïŋ nyuɔɔth ke tɔ̈c, cäth de rïŋ ku tɔ̈c de rim në raan yic (LX-2) ku yenë kë lëu bï rim gël [15]. Ku na yïn ya, ke ka këc deet apath ye IPA cɔk dhukciɛ̈ɛ̈n në luɔɔi yenë HSC apoptosis ku jɔl ya luɔɔi de liver cɔk loi rot.
Ëtënë, ɣok aye nyuɔɔth lɔnadɛ̈ ke serum IPA ee thiääk kenë luɔɔi de käke guɔ̈p cï röt juak në pïïr de raan yic, pïïr de raan ëbɛ̈n, ku pïïr bääric në liver de kɔc cï dït apɛi ku cie kɔc nɔŋ tuaany de 2 de thukar (KOBS). Ku na yïn ya, ke ɣok acï yök ke IPA alëu bï ya cɔk tɔ̈ ke cïn kë ye rot looi ku bï kä ye tɔ̈ në raan guöp ya cɔk riääk në dhöl yenë käŋ looi yiic. Kä cï bɛ̈n bei kënë aye luɔɔi yam nyuɔɔth tënë IPA, ye yen looi bï ya kë lëu bï ya töök ago liver fibrosis ya cɔk dhukciɛ̈ɛ̈n.
Athör thɛɛr cï kek kueen në akut de KOBS yic acï nyuɔɔth ke kɔc tuany nɔŋ tuany ë nhom aye naŋ IPA tɔ̈ piiny të thööŋë kek kenë kɔc tuany cïn tuany ë nhom [15]. Ku bï kä lëu bïk kɔc liääp nhïïm ke tuaany de 2 de thukar nyaai, ɣok acï kɔc tuany dït apɛi ke 116 dɔm ke cïn tuaany de 2 de thukar (run thöŋ ± SD: 46.8 ± 9.3 run; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m2) (Table 1) tënë kuɛ̈n ŋoot ke lɔ tueŋ]. Kɔc ëbɛ̈n cë röt mat thïn aacï wël ë lëk gɔ̈t ku lööŋ ke kuɛ̈n acï keek gam në Akutnhom de Lööŋ ke Ɣön-laac ë Ɣön-laac cït mɛn tɔ̈u yen në Löŋ de Ɣön-laac yic (54/2005, 104/2008 ku 27/2010).
Kä cï kek yök në thɛɛr ke töök yiic ku ka cï kek ya caath në kɔc ŋic tuanytuɛɛny cïmën cenë kek ya lueel wënthɛɛr [17, 18]. Käke thëm aye keek mat yiic në Table S1 ku kaa cï keek lueel wënthɛɛr [19].
Kä cï keek yök ke pïu cï lac thök aacï keek caath në kë cïn kë wïc bï yök në pïu yiic (LC-MS) tënë cɛɛth de käke pïu yiic (n = 116). Kä cï them aacï keek caath ke luui ajuɛɛr UHPLC-qTOF-MS (1290 LC, 6540 qTOF-MS, Agilent Teknolögïth, Waldbronn, Karlsruhe, Germany) cït mɛn cïnë ye lueel wënthɛɛr19. Të ŋic ë pïu ë isopropyl (IPA) acï tɔ̈u në thɛɛr ke gël ku thööŋ de MS/MS ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu. IPA ë thëm de thëm (të tɔ̈ nhial) acï yök në thëm dɛ̈t peei yic [20].
RNA de liver ëbɛ̈n acï looi në luɔɔi de Illumina HiSeq 2500 ku wël cï kek yök aacï kek ya guiir cïmën cenë kek ya guiir wënthɛɛr [19, 21, 22]. We acï kä wääc ke thööŋ de kä cï gɔ̈t looi ye luɔɔi de kä ye röt looi/kä ye röt looi ke 1957 ke kä cï keek kuany tënë MitoMiner 4.0 [ 23 ]. Cɛɛth de DNA de liver acï looi në luɔɔi de dhöl töŋ cï lueel wënthɛɛr [24, 25].
Käk ë nhom ë raan (LX-2) aacï keek gäm kɔc ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ ë pïŋ. Ku bï thëm de luɔi de IPA kuany, LX-2 ë thëm acï thɔ̈ɔ̈ŋ ke thëm wääc de IPA (10 μM, 100 μM ku 1 mM; Sigma, 220027) në DMEM/F12 thëm ë 24 h. Ku ŋoot ke lɔ tueŋ, bï IPA yök ke lëu bï HSCs cïï lui, ke LX-2 acï keek määt yiic kenë 5 ng/ml TGF-β1 (R&D ajuɛɛr, 240-B-002/CF) ku 1 mM IPA në pïu cïn yic pïu ë pïu yiic në 24 h. Në thöŋ de gël de riäth, 4 nM HCL nɔŋic 0.1% BSA acï luɔ̈ɔ̈i tënë TGF-β1 töök ku 0.05% DMSO acï luɔ̈ɔ̈i tënë IPA töök, ku keek kedhie aacï keek luɔ̈ɔ̈i në tök tënë töök cï mat.
Aciëŋ acï them në luɔɔi de FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit ke 7-AAD (Biolegend, San Diego, CA, USA, Cat# 640922) cït mɛn cïnë raan ë loi yen ye lueel. Në wël lik yiic, ke LX-2 (1 × 105 de kä cï kek tääu në pïu yiic) aake cï kek ya tɔ̈ɔ̈u në akɔ̈l tökic në pïu yiic kaa 12 ku ka cï kek ya tɔ̈ɔ̈u në käjuëc ke IPA ka IPA ku jɔl ya TGF-β1. Në kööl dɛ̈t kënë yic, ke kä ye lööny në pïu yiic ku kä ye röt tääu në pïu yiic aacï kek bɛ̈n määt yiic, ku ka cï kek ya lɔk në PBS yic, ku ka cï kek bɛɛr ya tääu në Annexin V yic, ku ka cï kek ya tääu në FITC-Annexin V yic ku jɔl ya 7-AAD në minit ka 15 yiic.
Mitochondria në kä pïr yiic aacï kek ya tääu në kä ye röt looi yiic në luɔɔi de MitotrackerTM Red CMXRos (MTR) (Thërmo Fisher Scientific, Carlsbad, CA). Në thëm de MTR yic, ke kä ke LX-2 aake cï kek ya tääu në thëm thöŋ yic kenë IPA ku jɔl ya TGF-β1. Në thɛɛr kaa 24 yiic, ke kä pïr aacï kek ya tääu në pïu yiic, ku ka cï kek ya lɔɔk në PBS yic, ku ka cï kek ya tääu në 100 μM MTR yic në pïu yiic në 37 °C në minit kaa 20 cïmën cenë ye lueel wënthɛɛr [ 26 ]. Në thööŋ de kä pïr ke cell yiic, ke dït de käm ku riɛl de käŋ acï kek ya caath në luɔɔi de kä ye kek tɛkpiny (FSC) ku jɔl ya kä ye röt tɛkpiny në baŋdɛ̈t (SSC), në tök.
Kä cï yök kedhiɛ (kä cï röt looi kaa 30,000) aacï kek ya yök në luɔɔi de NovoCyte Quanteon (Agilent) ku ka cï kek ya caath në luɔɔi de NovoExprës® 1.4.1 ka FlowJo V.10.
Ciin de wëëi ye cam (OCR) ku ciin de aliir ye lɔ nhial (ECAR) aacï keek them në thaar yic ke luui kën yenë aliir caath (Agilent Teknologï, Santa Clara, CA) cï tääu në kën yenë aliir caath cït mɛn cïnë raan loi yeen ye lueel. Në wël lik yiic, ke 2 × 104 LX-2 ë pïu/aɣeer aacï kek ya tääu në XF96 ë pïu yiic. Na cï thök ë thök ë thök ë thök, ke thök ë thök acï keek looi në thök ë thök (IPA) ku TGF-β1 (Dhöl ë thök ë thök 1). Cɛɛth de kä cï yök acï looi në luɔɔi de kë ye cɔl Seahorse XF Wave, nɔŋiic kën ye cɔl Seahorse XF Cell de riɛl de käke thëm de käke thëm. Në ye kën yic, ke thööŋ de pial de guɔ̈p (BHI) acï yup [27].
RNA abɛ̈n acï waaric në cDNA. Në kuɛɛr kɔ̈k, tïŋ kën yenë ye nyuɔɔth [15]. Käke mRNA ke 60S ke raan aye kek luɔ̈ɔ̈i ke ye kën yenë käŋ mac. Ajuɛɛr de PCR de Thaar Dït de QuantStudio 6 (Ajuɛɛr de Rɛ̈c, Raan de Pinynhom, Paan de Netherlands) acï luɔ̈ɔ̈i kenë TaqManTM Kë cï lac lɔtueŋ de Master Mix Kit (Ajuɛɛr de Kä ye Luɔɔi) wala Kë ye cɔl SYBR Lo-ROX Kit (Kë ye thɔ̈ɔ̈ŋ de kä ye yök, kä ye thɔ̈ɔ̈ŋ ke C ye yup), ku kä thiääk kenë yen. thëm (ΔΔCt) ku dhöl ∆∆Ct. Kä juëc ke kä ye röt looi aye keek bɛ̈i në Kä cï keek juak thïn ke S2 ​​ku S3.
DNA de käke guɔ̈p (ncDNA) ku DNA de käke guɔ̈p (mtDNA) aake cï keek nyaai në luɔɔi de DNeasy rim ku käke räl (Qiagen) cït mɛn cïnë keek lueel wënthɛɛr [28]. Ciin de mtDNA thiääk kenë mtDNA acï yup në thööŋ de thööŋ de mtDNA ëbɛ̈n cï tääu në thööŋ de thööŋ de ɣän ke DNA ke nuclear kaadiäk (mtDNA/ncDNA), cït mɛn cïnë ye lueel në dhɔ̈l ke 2 yiic.
Kä pïr aacï kek ya tääu në MitotrackerTM Red CMXRos (MTR) yic agonë ​​kä tɔ̈ në kaam de kä pïr yiic ku kä tɔ̈ në kä yiic ya tïŋ. LX-2 käke (1 × 104 käke/kë puɔth) aake cï keek com në kä cï keek tääu në maraya yic në kä thöŋ ke kä cï keek tääu në maraya yic (Tïŋ de GmbH, Martinsried, Germany). Në thɛɛr kaa 24 yiic, ke kä pïr ke LX-2 aacï kek ya tääu në 100 μM MTR yic në thaa 20 në 37 °C ku kä cï kek yök në DAPI yic cïmën cenë kek ya lueel wënthɛɛr [29]. Ajuɛɛr de kä ye tïŋ në kä thiik yiic aye keek tïŋ në kë yenë daai në kä thi kor (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Germany) cï tääu në kë yenë daai në kä thiik ke Zeiss LSM 800 në 37 °C në aliir cï liɛɛr yic keke 5% de CO2 ye luui në 1NA×3je. Wɔ cï thuraa ke Z-series kaa thiäär yök tënë gɛɛr de kë ye nyuɔɔth. Z-tök anɔŋic 30 ë thäät, ë tök anɔŋic 9.86 μm dït. Në këde kä cï ke them yiic, athuɔ̈ɔ̈r ke ɣän wääc kaa thiäär ke tïŋ aacï keek yök në luɔɔi de ZEN 2009 (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Germany), ku cɛɛth de kä ye röt looi në käke guɔ̈p acï looi në luɔɔi de käke thura (v1.54d) [30, 31] cï keek lueel në käke thëm.
Kä cï kek tääu thïn aacï kek ya tääu në biäk de 2% de glutaraldehyde në 0.1 M de phosphate buffer yic, ku ka cï kek ya tääu në 1% de osmium tetroxide yic. Kä thiik apɛi aacï keek looi ku tääu keek në 1% de kä ye cɔl uranyl acetate (Merck, Darmstadt, Germany) ku 1% de kä ye cɔl lead citrate (Merck, Darmstadt, Germany). Thuraa ke kä juëc cï röt looi aacï keek yök në luɔɔi de kë yenë käŋ tïŋ në kä thiik ke JEM 2100F EXII (JEOL Ltd, Tökyo, Japan) në kë ye lac lɔtueŋ de 80 kV.
Tɛ̈n yenë LX-2 tɔ̈ thïn cï looi në IPA në thaa 24 h acï ya caath në kë yenë käŋ tïŋ në 50x në kë yenë käŋ tïŋ në mac cï tääu në mac yic (Zeiss Axio Vert.A1 ku AxioCam MRm, Jena, Germany).
Kä cï yök ke paanakïm aacï keek lueel ke ye kën thööŋë ± kën thööŋë thööŋë wala kën ciɛɛl (kë tɔ̈u kam de käŋ kaa ŋuan: IQR). Cɛɛth de kueer töŋ de kä wääc (kä wääc lɔtueŋ) wala χ2 thëm (kä wääc ke tɛ̈ɛ̈k) aacï keek luɔ̈ɔ̈i bïnë ke kä wääc thɔ̈ɔ̈ŋ në kaam de akuut ke kuɛ̈n kaa diäk. Kë cie yic (FDR) acï luɔ̈ɔ̈i bïnë kä juëc ke them looi, ku genes nɔŋ FDR < 0.05 aacï keek yök ë ke thiekiic në kuɛ̈n yic. Cɛɛth de thööŋ de Spearman acï looi bï thööŋ de CpG DNA thɔ̈ɔ̈ŋ keke riɛl de kë ye nyuɔɔth de IPA, keke thööŋ de p (p < 0.05) cï lueel.
Cɛɛth de dhöl acï looi në luɔɔi de kë yenë käŋ tïŋ në wɛbthait yic (WebGestalt) tënë kä cï gɔ̈t kaa 268 (kë cï gɔ̈t p < 0.01), kä cï gɔ̈t thiääk ke 119 (kë cï gɔ̈t p < 0.05), ku 4350 CpGs ye cath në kä cï gɔ̈t yiic kaa 309 cï thiääk kenë IPAs. Venny DB (kë cï looi në 2.1.0) acï bɛ̈n ya luui në yen agonë ​​genes ya yök, ku StringDB (në kë cï looi në 11.5 yic) acï bɛ̈n ya luui në yen agonë ​​mïïth ya tïŋ në tɛ̈n yenë kek yök thïn.
Në thëm de LX-2, kä cï them aacï keek them bïkë piath në luɔɔi de thëm de D'Agostino-Pearson. Kä cï yök aacï keek yök tën käŋ kaa diäk cï röt dhuɔ̈kpiny ke kä pïr ku tɛ̈ɛ̈uë keek tën kueer töŋ ANOVA keke thëm de Bonferroni. P-thööŋ tɔ̈u piiny në 0.05 aye yök ke thiekic në kuɛ̈n yic. Kä cï yök aye keek nyuɔɔth ke ye kën thööŋë ± SD, ku ciin de kä cï them aye nyuɔɔth në thööŋ tökic. Kä cï keek tïŋ ku kä cï keek thuur abɛ̈n aacï keek looi në luɔɔi de käke thööŋ de käke thööŋ de Windows (Këde thööŋ de käke thööŋ Inc., thööŋ de 8.4.3, San Diego, USA).
Kë tueeŋ, ɣok acï thiääk de IPA de pïu yiic thiëëc kenë liver, guɔ̈p ëbɛ̈n, ku jɔl ya kä cï kek gɔ̈t në pïu yiic. Në thööŋ de kä cï kek gɔ̈t yiic, ke kën ril yic apɛi ye thiääk kenë tɔ̈c de IPA në rim yiic ee MAPKAPK3 (FDR = 0.0077; 3); në thɛɛr ke tɔ̈c yiic, ke tɔ̈c ril yic apɛi ee AKT1 (FDR = 0.7621; AKT tɔ̈c 1) (Athör ë tɔ̈c 1 ku tɔ̈c ë tɔ̈c ë tɔ̈c 2).
Ku jɔl ya wël cï kek gɔ̈t në pinynhom (n = 268; p < 0.01) ku jɔl ya wël cï kek gɔ̈t në pïu yiic (n = 119; p < 0.05), ku thökde acï apoptosis bɛ̈n yök ke yenë dhöl thiekic apɛi yenë kɔc tɔ̈ thïn yök. Në thɛɛr ke tɔ̈ɔ̈u de kä ye yök në pïu yiic, ke ɣok aacï nhïïm ya tïït në tɔ̈ɔ̈u de pïu yiic (FDR = 0,00001), tɔ̈ɔ̈u de pïu yiic (FDR = 0,00029), ku jɔl ya dhɔ̈l yenë TNF nyuɔɔth (FDR = 0,000006) (Thöŋ 1A, Thöŋ 2, ku Thura 1).
Cɛɛth cï looi në pinynhom, kä cï kek gɔ̈t në mitochondria yic, ku jɔl ya DNA ye tɔ̈ në nhom de raan yic në thiääk kenë IPA tɔ̈ në raan yic. A ee tɔ̈ ke ye 268 ke kä cï kek gɔ̈t në pinynhom, kä cï kek gɔ̈t ke 119 ke thiääk kenë mitochondria, ku kä cï kek gɔ̈t ke DNA cï kek tääu në ɣän ke CpG yiic kaa 3092 thiääk kenë thëm de IPA de rim (p thööŋ < 0.01 tënë kä cï kek gɔ̈t në pinynhom ku DNA cï gɔ̈t, ku p thööŋ de mitoch <0). Kä dït cï röt mat yiic aye nyuɔɔth në ciɛɛl (AKT1 ku YKT6). B Kë ye nyuɔɔth de yök de käŋ kaa 13 nɔŋ kë dït apɛi ye yök (0.900) kenë käŋ kɔ̈k acï looi tënë käŋ kaa 56 cï röt mat (tënë thäm col) cï thiääk apɛi kenë thëm de serum IPA në luɔɔi de kë yenë käŋ looi në aliiric cɔl StringDB. Kë ye maŋök: Kä ye röt looi aye kek nyuɔɔth në puɔ̈ɔ̈c de kä ye röt looi yiic (GO) në biäk de räl yiic: kä ye röt looi në guöp yic (GO: 0005739). AKT1 ee mïïth nɔŋ ciin dïït apɛi (0.900) në rɔ̈mpiny kenë mïïth kɔ̈k peei cït tɛ̈n cenë kek yök thïn (cït tɛ̈n cenë kek ya luɛɛl thïn në wël cï kek yök yiic, kä cï kek ya them, kä cï kek yök në tɔ̈ɔ̈u yic, ku jɔl ya kä cï kek ya lueel nëtök). Kä ye tɔ̈ në network yic aye mïïth nyuɔɔth, ku thökde aye mïïth tɔ̈ në kaam de mïïth yiic nyuɔɔth.
Në kë yenë kä thiik tɔ̈ në yï guöp ya cɔk tɔ̈ apath në DNA yic [32], ɣok acï bɛ̈n ya thiëëc mɛn yenë IPA tɔ̈ në rim yiic thiääk kenë DNA tɔ̈ në yï guɔ̈p yic. Acuk yök ke ɣän dït kaa rou ke mɛ̈th thiääk kenë thëm de IPA në rim yiic aake thiääk kenë ɣän juëc ke 3 (C19orf55) ku ɣän ke mɛ̈ɛ̈c ë pïu ë pïu yiic B (kë thiin koor) raan 6 (HSPB6) (Athör ë pïu yiic 3). DNA ë 4350 CpG (p < 0.01) acï thiääk kenë thëm de IPA ë pïu yiic ku acï dït apɛi në dhɔ̈l ë pïïr bääric (p = 0.006) (Thöŋ 1A, Thöŋ 2, ku Thura 1C ë thëm).
Ku bï dhɔ̈l ke pïïr ya deetic apath në kaam de IPA de rim, kä cï kek gɔ̈t në pinynhom, kä cï kek gɔ̈t në mitochondria yic, ku jɔl ya DNA methylation në liver de raan yic, ɣok acï käjuëc cï kek yök në dhɔ̈l thɛɛr cï kek ya thɔ̈ɔ̈ŋ yiic ya looi (Thiɛ̈ŋ 1A). Kä cï bɛ̈nbei në thëm de dhɔ̈l ke 56 cï röt mat yiic (në thëm col yic në Thura 1A yic) acï nyuɔɔth lɔnadɛ̈ ke dhɔ̈l ke apoptosis (p = 0.00029) acï dhɔ̈l kaa rou ke thëm de käŋ kaadiäk nyuɔɔth: AKT1 ku YKT6 (YKT6 v-SNARE thöŋ në Thura de Ven2 yic), cït mɛn cïnë ye nyuɔɔth thïn. 1A). Kë cie gɔ̈r, ɣok acï yök lɔn ye AKT1 (cg19831386) ku YKT6 (cg24161647) thöŋ apath kek thök ë IPA ë rim (Athör ë 3 cï juak thïn). Acän ba kä lëu bïk röt ya mat në kaam de kä ye kek cak në gene yiic ya ŋic, ɣok acï genes kaa 13 bɛ̈n kuany nɔŋ käjuëc ye kek yök (0.900) në genes kaa 56 cï röt mat yiic ke ye kë bï kek ya tääu thïn ku looiku kë bï kek ya yök. Cït tɛ̈n cenë ye lueel thïn në tɛ̈n yenë kɔc röt gam thïn (gɛ̈m de röt në baŋ ciɛɛl), ke AKT1 gene nɔŋ ciin dït apɛi (0.900) yenëka tɔ̈ nhial (Thiɛ̈ŋ 1B).
Cï tɛ̈n cenë ye luɛɛl thïn në dhɔ̈l cï kek ya thɔ̈ɔ̈ŋ yiic, ɣok acï bɛ̈n yök ke apoptosis yenëka ye dhöl tueeŋ yenë kɔc thou, ku ɣok acï bɛ̈n ya thiëëc mɛn bï IPA ya töök në dhöl benë HSCs ya tɔ̈ në vitro yic. Acuk nyuɔɔth wënthɛɛr lɔnadɛ̈ ke thëm wääc de IPA (10 μM, 100 μM, ku 1 mM) aake cie kä rɛc ke LX-2 [15]. Kuɛ̈n kënë acï nyuɔɔth lɔnadɛ̈ ke IPA ë töök në 10 μM ku 100 μM ee ciin de kä pïr ku kä cï thou juak. Ku na yïn ya, ke të thööŋë yen kenë akuɔ̈tnhïïm cï kek mac, ke pïïr de cell acï bɛ̈n dhukpiny në 1 mM IPA yic, ku pïïr de cell acï bɛ̈n ya ŋoot ke këc rot waar (Thoŋ 2A, B). Në thɛɛr kɔ̈k yiic, ago yök ke tɔ̈c ë tɔ̈c ë tɔ̈c ë tɔ̈c ë tɔ̈c ë LX-2, ɣok acï 10 μM, 100 μM, ku 1 mM IPA them në 24 h (Thöŋ 2A-E ku Thura 3A-B ë thööŋ). Kë cie lac ŋic, IPA 10 μM ku 100 μM acï thök de thök de thök (%) dhuɔ̈kciëën, ku na yïn ya, IPA 1 mM acï thök de thök de thök ku thök de thök (%) juak të thööŋë yen kenë thök de thök ku ka cï kuany bï ya looi në käjuëc kɔ̈k peei yiic (Thoŋ 2A–D).
IPA ee pïïr de LX-2 cɔk thou. Annexin V ku jɔl ya 7-AAD aye ya luui në dhɔ̈l kaarou yiic agonë ​​ciin de kä ye röt looi ya thɔ̈ɔ̈ŋ ku jɔl ya tɛ̈n yenë käŋ röt luɔɔi thïn në thëm de kä ye röt looi yiic. BA acï keek tääu në 10 μM, 100 μM ku 1 mM IPA në thɛɛr kaa 24 yiic wala kenë F–H TGF-β1 (5 ng/ml) ku 1 mM IPA në thɛɛr kaa 24 yiic. A: käk pïr (Annëxïn V -/ 7AAD-); B: sëlëls nïkrötïk (Annëxïn V -/ 7AAD+); C, F: thɛɛr (Annëxïn V +/ 7AAD-); D, G: thök (Annëxïn V+/7AAD.+); E, H: ciin de ciin de kä cï lac thou ku kä cï bɛ̈n në thɛɛr kɔ̈k yiic në ciin de kä cï thou yiic (%). Kä cï yök aye keek lueel ke ye kën thööŋë ± SD, n = 3 käke thëm lääu. Thɔ̈ɔ̈ŋ de kä cï kueen acï looi ke luui kueer töŋ ANOVA keke thëm de Bonferroni. *p < 0.05; p < 0.0001
Cïmën cï ɣok ye nyuɔɔth wënthɛɛr, 5 ng/ml TGF-β1 alëu bï HSC ya cɔk lui në thɛɛr juëc yiic në thɛɛr juëc yiic [15]. LX-2 ë thäät ë thäät ë 5 ng/ml TGF-β1 ku 1 mM IPA ë thäät ë thäät (Thöŋ 2E–H). TGF-β1 ë töök acie thök ë thök ë thök ë thök ë thök ë thök ë thök, ku na yïn ya, IPA ë töök ë thök ë thök ë thök ë thök ë thök (%) të thööŋë yen ke TGF-β1 ë töök (Thöŋ. 2E–H). Kä cï kek yök ëtënë aye nyuɔɔth ke 1 mM IPA alëu bï pïïr de raan ya cɔk thök në LX-2 yic ke cïn kë tɔ̈ kenë yen në TGF-β1 yic.
Acuk ŋoot ke ɣok wïc kë ye IPA looi në wëëi de kä ye röt looi në LX-2 yic. Kä cï bɛ̈n bei aa cïk nyuɔɔth lɔnadɛ̈ ke 1 mM IPA acï thëm de wëëi (OCR) dhuɔ̈kciëën: wëëi cie wëëi, wëëi tɔ̈ piiny ku wëëi dït apɛi, wëëi ye lɔ në proton yic ku wëëi ye ATP looi të thööŋë yen kenë akutnhom de gël (Thiɛ̈ŋ 3A, B), ku thëm de pial de guɔ̈p (BHI) akëc rot waar.
IPA ee wëëi de nhom cɔk tɔ̈ piiny në LX-2 yic. Wëëi ë nhom (OCR) aye nyuɔɔth ke ye kën ë wëëi ë nhom (wëëi cie wëëi ë nhom, wëëi ë nhom ë nhom, wëëi dït apɛi, wëëi ë nhom ë nhom, ATP ë nhom, SRC ku BHI). Kä cï kek tääu në A ku B yiic aacï kek ya tääu në 10 μM, 100 μM ku 1 mM IPA yic në thɛɛr kaa 24 yiic, në thɛɛr juëc yiic. C ku D aacï keek tääu në TGF-β1 yic (5 ng/ml) ku 1 mM IPA në thɛɛr cïn yic pïu ë 24 h, ë ke thöŋ. Kä cï kek them kedhiɛ aake cï kek ya tääu në DNA yic në luɔɔi de käke CyQuant. BHI: thööŋ de pialguɔ̈p de pïïr; SRC: gël de wëëi; OCR: thëm de pïu ë wëëi. Kä cï yök aye keek nyuɔɔth ke ye kën thööŋë ± kën thöŋ wääc (SD), n = 5 käke nyooth lääu. Thɔ̈ɔ̈ŋ de kä cï kueen acï looi ke luui kueer töŋ ANOVA ku thëm de Bonferroni. *p < 0.05; **p < 0.01; ku ***p < 0.001
Ku bï ŋiɛ̈c deetic apɛi në kë ye IPA looi në pïïr de TGF-β1-cï luui në LX-2 yic, ɣok acï pïïr de raan ëbɛ̈n thɔ̈ɔ̈ŋ në OCR (Thöŋ. 3C,D). Kä cï bɛ̈n bei aa cï nyuɔɔth lɔn ye TGF-β1 töök lëu bï pïu juëc ë wëëi, pïu ë pïu ë tɔ̈ɔ̈u (SRC) ku BHI thɔ̈ɔ̈ŋ ke akutnhom ë gël (Fig. 3C,D). Në ye mɛn, ke tɔ̈ɔ̈u cï mat kenë tɔ̈ɔ̈u acï tɔ̈ɔ̈u de wëëi ë pïu yiic, tɔ̈ɔ̈u de proton ku tɔ̈ɔ̈u de ATP cɔk tɔ̈ piiny, ku SRC ku BHI aake dït apɛi awär tɔ̈ɔ̈u cï keek tɔ̈ɔ̈u në TGF-β1 (Thöŋ. 3C,D).
Ku ɣok aacï “Thëm de Käk ë Riɛl ë Käŋ” looi ëya dɛ̈t cï bɛ̈i në thëm de Riɛl de Käŋ (Kë cï juak thïn. 4A–D). Cït mɛn cïnë ye nyuɔɔth në Fig. 3B yic, ke OCR ku ECAR kedhiɛ aacï röt bɛ̈n dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n në thök de TGF-β1, ku na yïn ya, ke ka cïn wuɔ̈ɔ̈c cï tïŋ në akuɔ̈tnhïïm cï kek mat yiic ku akuɔ̈tnhïïm ke IPA yiic të thööŋë kek kenë akuɔ̈tnhïïm cï kek mac. Ku ŋoot ke lɔ tueŋ, ke thɛɛr ke basal ku thɛɛr ke stress ke OCR aacï röt dhuɔ̈kciëën të cïnë keek mat ku IPA ë tɔ̈ɔ̈u cï keek thɔ̈ɔ̈ŋ ke akutnhom de gël (Kë cï juak thïn Fig. 4C). Kë cie gɔ̈r, kën thöŋ acï tïŋ ke töök cï mat, të cïn yen kë cï rot waar në basal ku thëm de ECAR cï tïŋ të thööŋë yen ke TGF-β1 töök (Kë cï juak thïn Fig. 4C). Në HSCs yiic, ke thök de thök de thök de thök ku thök de thök de thök de thök bï SCR ku BHI dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n të cï kek thök në thök de TGF-β1 acïï thök de thök de thök de thök (OCR ku ECAR) ye waar. Na cï kek lööm nëtök, ke kä cï kek yök ëtënë aye nyuɔɔth ke IPA alëu bï riɛl de HSCs ya tekic, ku ye lueel ke IPA alëu bï riɛl tɔ̈ piiny ya cɔk tɔ̈ piiny ago HSC ya cɔk lɔ tueŋ ke cïï lui (Thoŋ de 4D).
Kë ye IPA looi në pïïr de raan yic acï bɛ̈n thiëëc në dhɔ̈l kaadiäk ke pïïr de raan yic ku jɔl ya tɛ̈n yenë käŋ rek thïn ku jɔl ya MTR staining (Thöŋ de 4 ku jɔl ya Thura de 5). Thura 4 ee nyuɔɔth lɔnadɛ̈, të thööŋë yen ke akutnhom de gël, TGF-β1 ë töök acï thök de piny tɔ̈u nhial, namba de thök, thök de thök ëbɛ̈n, ku namba de thök ë thök (Thöŋ 4A ku B) ku waar thök de mitochondria tënë thök ë thök agut cï thök ë thök ciɛɛl (Thöŋ 4C). Ee töök de IPA yetök yenëka ye ciin de mitochondria cɔk tɔ̈ piiny ku ye ciin de mitochondria waar në ciin de kä cï röt göl yiic agut cï ciin de kä tɔ̈ ciɛɛl të thööŋë kek kenë akuɔ̈tnhom ye kek mac (Thoŋ 4A). Në thööŋ, ke thöŋ de käŋ, thöŋ de bɛ̈ɛ̈rde, ku jɔl ya luɔɔi de mitochondrial cï kek ya caath në MTR (Thiɛ̈ŋ de 4A ku E) acï döŋ ke cïï rot ye waar ku kee käkë acie wuɔ̈ɔ̈c në akuɔ̈tnhïïm yiic. Na cï kek mat nëtök, ke kä cï kek yök ëtënë aye nyuɔɔth ke TGF-β1 ku jɔl ya IPA aye röt looi agokë tän de käm ya cɔ̈kpiny ku jɔl ya tɛ̈n yenë kek yök thïn në LX-2 yiic.
IPA ee pïïr de raan cɔk riääk ku bï DNA ya juak në LX-2 cells yiic. A. Thuraa ke tɔ̈u në nyin de kä pïr ke LX-2 cï keek tääu në TGF-β1 (5 ng/ml) ku 1 mM IPA në 24 h në thɛɛr cïn yic pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu. Kä cï yök kedhiɛ anɔŋic thuraa kaa 15 në akutnhom tökic. Wek aacï thuraa ke Z-stack kaa 10 yök tënë gɛɛr de kë cï them. Töŋ de Z-axis anɔŋic käŋ kaa 30, ku töŋ de kek anɔŋic dït de 9.86 μm. Thëm kë: 10 μm. B. Kä ye tɔ̈ në nyin de kɔc yiic (mitochondria yetök) aye kek ŋic në luɔɔi de kä ye röt waar në thura yic. Cɛɛth de kä juëc ku thööŋ de kä ye röt rek ke mitochondrial aacï kek ya looi tënë cells kedhiɛ në akuɔ̈tnhïïm yiic. C. Kä ye röt lac looi ke thöŋ de kä ye röt looi në ke yiic. Kä thiɔ̈k ke 0 aye thura de kë gool nyuɔɔth, ku kä thiɔ̈k ke 1 aye thura de filamentous nyuɔɔth. D DNA de mtDNA (mtDNA) acï yök cït mɛn cïnë ye lueel në Käk ku Kuɛɛr ke Luɔɔi. E MitotrackerTM Red CMXRos thëm acï looi në thëm de pïu ë thëm (kä cï röt looi kaa 30,000) cït mɛn cïnë ye lueel në Käk ku Kuɛɛr. Kä cï yök aye keek nyuɔɔth ke ye kën thööŋë ± SD, n = 3 käke thëm lääu. Thɔ̈ɔ̈ŋ de kä cï kueen acï looi ke luui kueer töŋ ANOVA ku thëm de Bonferroni. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0,001; p < 0.0001
Ku ëcï mtDNA tɔ̈ në LX-2 yic bɛ̈n caath ke ye kë ye namba de mɛ̈th nyuɔɔth. Të thööŋë yen ke akutnhom de gël, ke mtDNA tɔ̈ thïn acï rot juak në akutnhom de TGF-β1-cï tɔ̈ɔ̈u (Thiɛ̈ŋ 4D). Të thɔ̈ɔ̈ŋë yen kenë akutnhom cï TGF-β1-cï tɔ̈ɔ̈u, ke mtDNA tɔ̈ thïn acï bɛ̈n dhukpiny në akutnhom cï tɔ̈ɔ̈u yic (Thöŋ 4D), ku ye lueel ke IPA alëu bï mtDNA tɔ̈ thïn ya dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n ku lëu bï ya ciin de mtDNA ku jɔl ya wëëi de mɛ̈th (Thiɛ̈ŋ 3C). Ku na yïn ya, ke IPA acï bɛ̈n ya tïŋ ke cï mtDNA tɔ̈ në töök yic ya tekic ku ka këc luɔɔi de MTR ya riɔ̈ɔ̈kic (Thoŋ 4A–C).
Acuk thiääk de IPA kenë mRNA de genes ye thiääk kenë thök de nhom, thök de nhom, pïïr, ku jɔl ya thök de nhom në LX-2 cells yiic (Thoŋ 5A–D). Cï thɔ̈ɔ̈ŋ kenë akutnhom cï mac, akutnhom cï TGF-β1 looi acï dït de kä ye röt looi nyuɔɔth cïmën de collagen type I α2 chain (COL1A2), α-aciëŋ ë räl (αSMA), räl ë räl ë rïŋ (MMP2), räl ë rïŋ ë rïŋ ë rïŋ (MMP2), ku rɛ̈l ë räl ë rïŋ ë räl (RPD). dït ë fibrösïs ku äctïvätïön. Ku na yïn ya, ke të thööŋë kek kenë akuɔ̈tnhïïm ye kek mac, ke töök de TGF-β1 ee mRNA de mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c (PXR), mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c (PXR), mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c (CASP8), mäpkaPK3, ë mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c ë mɛ̈c (NFκhibiB1A) cɔk tɔ̈ piiny. β (IKBKB) (Thuɔ̈ɔ̈r 5A–D). Të thööŋë yen kenë TGF-β1, ke töök cï mat kenë TGF-β1 ku IPA acï tɔ̈c de COL1A2 ku MMP2 cɔk tɔ̈ piiny, ku ëcï mRNA de PXR, TIMP1, B-cell lymphoma-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκBKB1-2 juak. IPA ee töök de MMP2, Bcl-2-thiääk kenë mïïth ke X (BAX), AKT1, mïïth ke 1 (OPA1), ku mïïth ke 2 (MFN2) cɔk tɔ̈ piiny apɛi, ku tɛ̈ɛ̈k de CASP8, NFκB1A, NFκB1B acï rot juak kenë akutnhom de gël. Ku na yïn ya, ke ka cïn wuɔ̈ɔ̈c cï yök në tɛ̈n yenë caspase-3 (CASP3) rot luɔɔi thïn, ku jɔl ya APAF1, ku jɔl ya MFN1, ku jɔl ya FIS1. Në mät yic, ke kä cï kek yök ëtënë aye nyuɔɔth ke töök de IPA ee luɔɔi de genes thiääk kenë fibrosis, apoptosis, pïïr, ku jɔl ya tɛ̈n yenë käŋ röt waar thïn ya cɔ̈kpiny. Kä cï ɣok ke yök aye nyuɔɔth lɔn ye IPA töök ë fibrosis ë LX-2 ë thäät yiic cɔk tɔ̈ piiny; në ye thaa kënë yic, ke ka ye pïïr cɔk loi rot në gɛ̈ɛ̈r de kä ye röt looi yiic agokë ya cië ye bɛɛr luui.
IPA ee luɔɔi de kä ye röt looi në riäm yiic, kä ye lac thou, pïïr, ku jɔl ya kä ye röt waar në cells ke LX-2 yiic ya cɔ̈kpiny. Kä cï röt looi aye mRNA nyuɔɔth ke thiääk kenë gël de kä tɔ̈ në raan guöp (RPLP0 ka PPIA) të cenë LX-2 ya tääu në TGF-β1 ku IPA yic në thɛɛr kaa 24 yiic. A ee fibroblasts nyuɔɔth, B ee räl cï thou nyuɔɔth, C ee räl ŋoot ke pïïr nyuɔɔth, ku D ee räl ye röt waar nyuɔɔth. Kä cï yök aye keek nyuɔɔth ke ye kën thööŋë ± kën thöŋ wääc (SD), n = 3 käke nyooth lääu. Thɔ̈ɔ̈ŋ de kä cï kueen acï looi ke luui kueer töŋ ANOVA ku thëm de Bonferroni. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0,001; p < 0.0001
Ku, gɛ̈ɛ̈r de dït de räl (FSC-H) ku gɛ̈ɛ̈r de räl (SSC-H) aacï kek ya caath në thëm de räl (Thoŋ 6A,B), ku gɛ̈ɛ̈r de räl ke IPA cï kek ya töök acï kek ya caath në thëm de thëm de thëm de thëm de thëm (TEM) ku thëm de thëm de thëm de thëm de thëm (Thoŋ de 6). Cït mɛn yenë ye thɔ̈ɔ̈ŋ, ke kä tɔ̈ në akut de TGF-β1-cï tɔ̈ɔ̈u yic aacï röt juak në dïtden yic të thööŋë kek kenë akuɔ̈tnhom cï kek mac (Thöŋ 6A,B), ku ye nyuɔɔth ke dït de kä cï röt looi në thɛɛr juëc yiic (ER*) ku kä cï röt juak në thɛɛr ke pïïr yiic (P), ye kä cï röt juak në thɛɛr ke tɔ̈c yiic (HSC) nyuɔɔth (Thöŋ de 6A). Ku na yïn ya, ke thööŋë kek kenë akut cï TGF-β1 ya tɔ̈ɔ̈u, ke dït de räl, dït de räl (Thöŋ 6A,B), ku jɔl ya ER* tɔ̈ thïn aacï röt bɛ̈n dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n në akut cï TGF-β1 ku IPA määt yiic (Thöŋ 6A). Ku na yïn ya, ke töök de IPA acï dït de rïŋ, thök de rïŋ (Thöŋ 6A,B), P ku ER* tɔ̈ thïn (Thöŋ 6A) cɔk tɔ̈ piiny të thööŋë kek kenë akutnhom de gël. Në ye mɛn, ke kä tɔ̈ në mɛ̈c yiic ke apoptotic acï röt juak në 24 h ë IPA ë töök yiic të thööŋë kek kenë akutnhom ë gël (athör ɣer, Fig. 6B ë thäät yiic). Na cï kek määt yiic, ke kä cï kek yök ëtënë aye nyuɔɔth ke 1 mM IPA alëu bï HSC apoptosis ya cɔk loi rot ku bï käjuëc ye röt geer në TGF-β1 yic ya dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n, ku kän alëu bï ya thiääk kenë HSC cïï luui.
IPA ee dït de käm ku riɛl de käŋ waar yiic në LX-2 käm yiic. Thura ye tɔ̈u në nyin de käke cäth de käke pïu yiic. Cɛɛth cï looi acï ajuɛɛr de gël de käŋ looi tënë LX-2: SSC-A/FSC-A bï ciin de käŋ lueel, FSC-H/FSC-A bï käŋ kaa rou ŋic, ku SSC-H/FSC-H tënë dït de käŋ ku kä ril yiic ke cɛɛth. Kä cï kek tääu në pïu yiic aacï kek ya tääu në pïu yiic në thɛɛr kaa 24 yiic. LX-2 cells aacï keek tɛkpiny në ɣän tɔ̈ piiny në baŋ ciɛɛm (SSC-H-/FSC-H-), ɣän tɔ̈ nhial në baŋ ciɛɛm (SSC-H+/FSC-H-), ɣän tɔ̈ piiny në baŋ cuëëc (SSC-H-/FSC-H+), ku ɣän tɔ̈ nhial në baŋ cuëëc (SSC-H+/FSC-H+) në thëm de käm ku thëm de käm. B. Tɛ̈n yenë käŋ röt luɔɔi thïn acï ya caath në dhöl yenë käŋ thɔ̈ɔ̈ŋ në FSC-H (tɛ̈ŋ de käŋ tueŋ, dït de käŋ) ku jɔl ya SSC-H (tɛ̈k-tɛ̈k de käŋ në baŋdɛ̈t, riɛl de käŋ) (kä cï röt looi kaa 30,000). Kä cï yök aye keek nyuɔɔth ke ye kën thööŋë ± SD, n = 3 käke thëm lääu. Thɔ̈ɔ̈ŋ de kä cï kueen acï looi ke luui kueer töŋ ANOVA ku thëm de Bonferroni. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001 ku ****p < 0.0001
Kä ye röt waar në gut yic cïmën de IPA acï bɛ̈n ya wël tueeŋ yenëke rïthäc looi, ku yekë lueel ke kä yam lëu bï kek ya yök në gut yic. Ku na yïn ya, ke ka ye kɔc miɛ̈t puɔ̈ɔ̈th apɛi në kë yenë IPA, man ye ya kë ye lac yök në kɔc yiic [15], ku ka cï ya nyuɔɔth ke ye kë lëu bï ya tɔ̈ ke ye kë ye lac yök në läi yiic [13, 14]. Ëtënë, ɣok acï ya nyuɔɔth në thaa tueeŋ yic ke thiääk de kaam de serum IPA ku jɔl ya tɔ̈ɔ̈u de liver në pinynhom ku jɔl ya DNA methylation në kɔc nɔŋ tuanytuɛɛny ke 2 (T2D) yiic, ku yekë pïïr de raan ëbɛ̈n nyuɔɔth, ku jɔl ya pïïr bääric, ku jɔl ya AKT1 ye liver cɔk tɔ̈ apath. Kë dɛ̈t yam cï puɔ̈ɔ̈cda looi ee kë cï ɣok yök ke IPA ee rot lac looi kenë apoptosis, tɛ̈n yenë käŋ röt luɔɔi thïn, tɛ̈n yenë käŋ röt luɔɔi thïn, ku jɔl ya tɛ̈n yenë käŋ röt waar thïn në LX-2 cells yiic, man ye nyuɔɔth ke riɛl tɔ̈ piiny ye HSC cɔk tɔ̈ ke cïï lui, ku ye IPA cɔk ye kë lëu bï fibrosis ya cɔk tɔ̈ apath.
Acuk yök ke thou de käŋ, thou de käŋ ku jɔl ya pïïr bääric kek aye dhɔ̈l thiekiic yenëke käŋ yök në liver yic ye thiääk kenë IPA ye cath në rim yiic. Riäk de ajuɛɛr de gël de piath de mɛ̈c (MQC) alëu bï mɛ̈c ya cɔk tɔ̈ ke cïï lui apath, ku bï mɛ̈c ya cɔk thök, ku kän ee MASLD cɔk loi rot [33, 34]. Ku na yïn ya, ke ɣok lëu buk ya jam wu IPA alëu bï ya tɔ̈ në gël de pïïr de raan yic ku jɔl ya gël de pïïr de raan yic në luɔɔi de apoptosis, mitophagy ku jɔl ya pïïr bääric në liver yic. Kä cï kek yök në ye luɔɔi kënë yic aacï ya nyuɔɔth ke genes kaarou aake ye lac yök në käŋ kaadiäk yiic: YKT6 ku jɔl ya AKT1. Alëu bï ya ŋic ke YKT6 ee mïïth ke SNARE ye tɔ̈ në ajuɛɛr de tɛ̈ɛ̈k de mïïth yiic. Ee luɔɔi de mïïth ye röt cam ku mïïth ye lac cam në jɔ̈k de kä riliic ke STX17 ku SNAP29 në mïïth ye röt cam yiic, ku ye mïïth ye röt cam ku lysosomes cɔk bɔ̈ nhial [35]. Në yekënë cök, ke määr de luɔɔi de YKT6 ee mitophagy cɔk riääk [36], ku tɛ̈ɛ̈u de YKT6 ee thiääk kenë lɔ tueŋ de tuany ë nhom (HCC), ye pïïr de raan nyuɔɔth [37]. Në baŋ dɛ̈t peei yic, ke AKT1 yenë kee gene thiekic apɛi ye rɔ̈mpiny ku ye luɔɔi thiekic looi në tuanytuɛɛny ke liver yiic, agut cï dhöl yenë PI3K/AKT käŋ nyuɔɔth, cäth de cell, cäth de cell, juɛ̈k-juɛ̈k de käŋ, tɔ̈c de käŋ, luɔɔi de käŋ, ku jɔl ya tɔ̈c de käŋ [38–40]. PI3K/AKT cï looi ee dhöl yenë rim cɔk loi rot (HSCs), man ye räl ye rim cɔk loi röt (ECM), ku tɔ̈cden alëu bï ya cɔk loi rot ku bï ya lɔ tueŋ ke tuanytuɛɛny ke liver fibrosis [40]. Në ye kënë nhom, ke AKT ee töŋ de kä ye p53 gël në pïïr de raan yic, ku AKT ee tɔ̈ ke ye thiääk kenë gël de pïïr de raan [41, 42]. Kä cï kek yök ëtënë aye nyuɔɔth ke IPA alëu bï ya tɔ̈ në liver mitochondria yic në kë ye yen lööŋ ke hepatocytes riɔ̈ɔ̈k në kaam de lɔ në apoptosis yic ka pïïr. Käk aye kek mac në AKT ku/ka YKT6, man ye ya kë thiekic apɛi tënë tɔ̈c de liver.
Kä cï kek yök në ye luɔɔi kënë yic aye nyuɔɔth ke 1 mM IPA ee pïïr de raan cɔk thou ku ye pïïr de raan cɔk tɔ̈ piiny në LX-2 yic ke cïï thiääk kenë TGF-β1. Acï bɛ̈n ya ŋic ke apoptosis ee dhöl dïït yenë tuanytuɛɛny ke guöp cɔk thök ku jɔl ya tɛ̈n yenë tuanytuɛɛny ke liver cɔk lui apath [4, 43]. Në yekënë cök, ke dhukciɛ̈ɛ̈n de BHI në cells ke LX-2 yiic të cenë kek ya määt yiic, acï wël yam bɛ̈n ya nyuɔɔth në luɔɔi de IPA yic në tɛ̈n yenë kek mac thïn. Në thɛɛr ke lɔ̈ŋ ku thɛɛr ke cïï lui, ke cells ke rim aye lac luui në luɔɔiden yic agokë ATP ya cak ku bïk ya naŋ käjuëc ye kek lac looi. Në baŋ dɛ̈t peei yic, ke luɔɔi de HSC ee wëëi de käm cɔk loi rot ku bï kä wïc kek ya dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n agokë ya lɔ në ɣän ke glycolytic yiic [44]. Kë ye yic lɔnadɛ̈ ke IPA acie pïïr de raan ye cɔk riääk ku ECAR ee lueel lɔnadɛ̈ ke kueer de glycolytic acie tɔ̈ ke ye kë tueŋ. Cïmën de, kuɛ̈n dɛ̈t acï nyuɔɔth lɔn ye 1 mM IPA lëu bï luɔɔi de pïu ë nhom ë raan yic, dhöl ë pïu ë raan yic (Huh7) ku pïu ë nhom ë raan yic (HUVEC); Ku na yïn ya, ke ka cïn kë ye yök në IPA yic në glycolysis yic në rim yiic, ku ye lueel ke IPA alëu bï rim ya riɔ̈ɔ̈k në rim kɔ̈k yiic [45]. Ku na yïn ya, ke ɣok aye jam wu 1 mM IPA alëu bï ya luui cïmën de kä thii ye röt määt, në kë lëu bï yen ya cɔk tɔ̈ piiny apɛi, tɛ̈n yenë cell röt luɔɔi thïn ku jɔl ya tɛ̈n yenë mtDNA rot waar thïn [46]. Kä ye rïŋ cɔk tɔ̈ ke cïï röt ye mat alëu bïk ciɛɛŋ de kɔc ya gël ku bïk HSC ya cɔk lui [47] ku bïk ATP ya cɔk tɔ̈ piiny në mïïth yiic cïmën de mïïth cïï röt ye mat (UCP) ka ANT. Cï tɛ̈n cenë ye luɛɛl thïn në thɛɛr ke cell yiic, ke kë cï rot looi kënë alëu bï cell ya gël tënë tɔ̈c ku/ka bï tɔ̈c ya cɔk dït [46]. Ku na yïn ya, ke puɔ̈ɔ̈c dɛ̈t peei awïc bï ya looi agonë ​​luɔɔi de IPA ya guiir ke ye kë ye guöp cɔk tɔ̈ ke cïï rot ye lac looi.
Ku ɣok aacï bɛ̈n thiëëc mɛn yenë wëëi ye rot waar në pïïr de raan yic në pïïr de LX-2 cells yiic. Kë ye kɔc miɛ̈t puɔ̈ɔ̈th apɛi, ee kë yenë TGF-β1 töök në thɛɛr ke tɔ̈c yiic në thɛɛr ke tɔ̈c yiic agut cï tɔ̈c tɔ̈ ciɛɛl, ku ye tɔ̈c de tɔ̈c cɔk lɔ piny ku bï DRP1 ya juak, man yenë kë thiekic ye tɔ̈c de tɔ̈c cɔk tɔ̈c [48]. Në yekënë cök, ke tɛ̈ŋ yic de käm ee thiääk kenë käjuëc riliic ye röt looi, ku gɛ̈ɛ̈r de käŋ në tɛ̈ɛ̈k de käŋ yiic ee kë thiekic apɛi tënë luɔɔi de käm (HSC), ku gël de käŋ ee HSC apoptosis bɛ̈i [49]. Ku na yïn ya, ke kä cï kek yök në ye luɔɔi kënë yic aye nyuɔɔth ke töök de TGF-β1 alëu bï ya cɔk lɔ piny në thɛɛr ke tɔ̈c yiic, man ye lac yök në thɛɛr ke tɔ̈c yiic ye thiääk kenë tɔ̈c de rim (HSCs). Në yekënë cök, ke wël cï kek yök në ye luɔɔi kënë yic aye nyuɔɔth ke IPA alëu bï ciin de mitochondria ya waar ago ya lɔ në ciɛɛl yic, ku kän ee OPA1 ku MFN2 cɔk tɔ̈ piiny. Puɔ̈ɔ̈c acï ya nyuɔɔth ke tɛ̈n yenë OPA1 tääu piny alëu bï ya cɔk lɔ piny në thɛɛr ke tɔ̈c yiic ku bï tɔ̈c ya cɔk loi rot [50]. MFN2 aŋic ke ye tɔ̈ në ciɛɛl de kä ye röt mat yiic ku jɔl ya kä ye lac thou [51]. Kä cï kek yök ëtënë aye nyuɔɔth ke tɛ̈ɛ̈u de LX-2 në TGF-β1 ku/ka IPA ee rot looi ke ye tän de käm ku dït de käŋ waar yiic, ku jɔl ya tɛ̈n yenë kek luɔɔi thïn ku jɔl ya tɛ̈n yenë kek yök thïn.
Kä cï kek yök në ye luɔɔi kënë yic aye nyuɔɔth ke mɛ̈ɛ̈t de TGFβ-1 ku jɔl ya IPA alëu bï mtDNA ya tekic ku jɔl ya tɛ̈n yenë mRNA rot luɔɔi thïn në thɛɛr ke pïïr yiic, ku jɔl ya tɛ̈n yenë pïïr tɔ̈ thïn ya gël në pïïr yic. Në yic, IPA acï mRNA de AKT1 ku kä thiekiic ke fibrosis cïmën de COL1A2 ku MMP2 bɛ̈n dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n, ku ka cï CASP8 bɛ̈n juak, man ye thiääk kenë thök de guöp. Kä cï bɛ̈nbei tënë ɣook acïk nyuɔɔth lɔn na cï IPA thök, ke BAX acï rot bɛ̈n dhuɔ̈kciɛ̈ɛ̈n ku mRNA acï bɛ̈n dhukpiny në TIMP1 yic, BCL-2 ku NF-κB acï rot juak, ku ye lueel ke IPA alëu bï pïïr ya cɔk tɔ̈ në thɛɛr ke pïïr yiic (HSCs) ye pïïr de raan gël në pïïr de raan yic. Käk alëu bïk ya luui ëke ye kä ye kɔc cɔk pïïr në rim yiic, man lëu bï ya thiääk kenë dït de mïïth ye rim cɔk thök (cïmën de Bcl-2), ku ye BAX cɔk tɔ̈ piiny, ku jɔl ya käjuëc riliic ye röt looi në kaam de TIMP ku jɔl ya NF-κB [5,7]. IPA ee käkeen ye looi looi në PXR yic, ku ɣok aacï yök ke tɔ̈ɔ̈u de TGF-β1 ku IPA ee PXR mRNA juak në thɛɛr ke tɔ̈c, ye nyuɔɔth ke gël de HSC ee tɔ̈c. PXR cï looi acï nyic ke ye HSC gël bï luui në kä ye röt looi yiic ku kä ye röt looi yiic [52, 53]. Kä cï kek yök në ye luɔɔi kënë yic aye nyuɔɔth ke IPA alëu bï ya luui në gël de HSCs cï kek looi yiic në kë yenë apoptosis ya cɔk tɔ̈ piiny, ku bï fibrosis ya cɔk tɔ̈ piiny ku bï kä ye röt looi ya cɔk pïïr apath, man ye ya ajuiɛɛr ye HSC cï looi ya waar ago ya kë cïï luui. Dɛ̈t peei lëu bï ya guiir në tɛ̈n yenë IPA luɔɔi thïn në apoptosis yic ee kë ye mitochondria cïï lui ya nyaai në mitophagy yic (dhöl yenë käŋ cam thïn) ku jɔl ya dhöl yenë TNF nyuɔɔth (Table 1), man ye thiääk kenë NF-κB. Kë ye kɔc miɛ̈t puɔ̈ɔ̈th apɛi, ee kë ye IPA thiääk kenë genes cï kek juak yiic aye lëu bïk käjuëc ke pïïr ya cɔk loi röt në dhɔ̈l ke apoptotic yiic [54], ku ye lueel ke IPA alëu bï dhɔ̈l ke pïïr ya cɔk loi röt ka bïk pïïr ya cɔk loi rot në yökden kenë kee genes käkë. Ku na yïn ya, ke tɛ̈n yenë IPA apoptosis cɔk loi rot ka pïïr në thɛɛr yenë HSC luui thïn ku jɔl ya tɛ̈n yenë kek luɔɔi thïn acïï kek ya deet apath.
IPA ee käm ye röt looi në mïïth yiic në tryptophan yic në käm yiic. Kuɛ̈n acï nyuɔɔth lɔn nɔŋ yen kä ye guɔ̈p gël, kä ye guɔ̈p cɔk ril, ku kä ye guɔ̈p cɔk ril në ɣän ke pïu yiic.[55] Kuɛ̈n acï nyuɔɔth lɔnadɛ̈ ke IPA alëu bï luɔɔi de kä ye pïu gël në pïu yiic ya cɔ̈kpiny ku bï pïu tɔ̈ në pïu yiic ya cɔk tɔ̈ piiny, man lëu bï ya tɔ̈ ke ye kë ye kɔc gël në pïu yiic.[56] Në yic, ke IPA ee ya lɛɛr në käjuäc ke guöp yiic në tɛ̈n yenë kek cath thïn, ku në kë yenë IPA naŋ käjuëc thöŋ kenë tryptophan, serotonin, ku jɔl ya kä ye kek yök në indole yic, ke IPA ee käjuëc ke guöp ya cɔk loi röt ku kän ee käjuëc ke guöp ya cɔk loi röt apath.[52] IPA alëu bï mëën kenë kä ye yök në tryptophan yic në ɣän yenë käŋ määt thïn ka kä ye käŋ yök, ku kän alëu bïk dhɔ̈l yenë käŋ röt waar ya riɔ̈ɔ̈kic. Kän acï kä wïc kek bï kek ya puɔ̈ɔ̈c në tɛ̈n yenë wal luɔɔi thïn ku jɔl ya tɛ̈n yenë wal tɔ̈ thïn ya deetic apath.[57] Acï bɛ̈n ŋoot ke bï tïŋ mɛn lëu bï yekënë rot ya looi ëyadɛ̈ në räl ke rim yiic (HSCs).
Ɣok aacï gam lɔn ye piööcda naŋ kä kɔ̈k cï röt gël. Ku bï kä thiääk kenë IPA ya tïŋ apath, ɣok aacï kɔc tuany nɔŋ tuany ë 2 de thɛ̈m de thɛ̈m (T2DM) nyaai. Ɣok aacï gam lɔn ye kën thök ë luɔi dït de kä cukku ke yök tënë kɔc tuany nɔŋ tuaany de 2 de thukar ku tuaany de liver cï lɔ tueŋ. Na cɔk ya tɔ̈ ke tɔ̈ në pïïr de raan yic ke ye 1–10 μM [11, 20], ke tɔ̈ në 1 mM IPA yic acï kuany ke ye tɔ̈ në thɛɛr juëc yiic ke cie tɔ̈ në pïu yiic [15] ku tɔ̈ në thɛɛr juëc yiic ke apoptosis, ke cïn kë wääc në ciin de kɔc cï thou. Na cɔk ya tɔ̈ ke tɔ̈ në thɛɛr juëc yiic ke IPA cï kek ya luɔ̈ɔ̈i në ye puɔ̈ɔ̈c kënë yic, ke ka cïn kë cï ya mat në yemɛɛn në kë de luɔɔi de IPA [52]. Naa cak tɔ̈u ke kä cï bɛ̈n bei tënë ɣook aye piath, ke dït de metabolic de IPA acï döŋ ke ye të tɔ̈u ë rïthäc thïn. Ku na yïn ya, ke kä cukku kek yök në ruääi tɔ̈ në kaam de IPA në rim yiic ku jɔl ya DNA methylation de liver yiic aake cie yök në räl ke rim yiic (HSCs) ku ka cï kek ya yök ëyadɛ̈ në räl ke liver yiic. Acuk lɔc buk LX-2 de raan ya luɔ̈ɔ̈i cï tɛ̈n cenë ye yök thïn wënthɛɛr në thëm de kä cï kek gɔ̈t yiic lɔn ye IPA thiääk kenë luɔɔi de rim (HSC) [15], ku HSCs kek aye rim dït ye tɔ̈ në thök de nhom yic. Liver ee yic naŋ käjuëc ke cells, ku na yïn ya, ke kä kɔ̈k peei cïmën de hepatocyte-HSC-ajuɛɛr ye guöp gël në guöp yic ku jɔl ya tɛ̈n yenë kek luɔɔi thïn agut cï mïïth kɔ̈k peei, ku jɔl ya tɛ̈n yenë kek luɔɔi thïn në liver yic.