Athör kënë ee biäk de wɛ̈t ë rïthäc “Bï thök ë thök ë thök ë thök ë thök ë thök ë thök ë thök”, tïŋ athör ë 5 ëbɛ̈n .
Kë ye tuanytuɛɛny ke fungal bɛ̈i në tiim yiic (Lib.) de Bary ee dhɔ̈l juëc ke luɔɔi looi ago tiim wääc ya dɔm. Puɔ̈ɔ̈c kënë acï bɛ̈n jam në luɔɔi de diamine L-ornithine, man ye ya kë cie mïïth ke amino acid ye mïïth kɔ̈k thiekiic cɔk loi röt, ke ye dhöl dɛ̈t peei benë kek ya mac apath agonë ​​mïïth ya cɔk loi röt apath. Kä cï kek ya them në kä cï kek ya them yiic acï kek ya nyuɔɔth ke L-ornithine ee cil de S. Naa cak tɔ̈u, alë bï riɛl de mold ɣer cuɔtpiny apɛi në ɣän ke ɣön ë tiim. Ku na yïn ya, ke L-ornithine ee cil de tiim cï kek ya tɔ̈ɔ̈u cɔk loi rot, ku kän ee yen nyuɔɔth ke thëm de L-ornithine ee cil de tiim cï kek ya tɔ̈ɔ̈u cɔk loi rot. Në ye kënë nhom, ke L-ornithine acï tɔ̈c de kä cïï tɔ̈ në pïu yiic (akölriëëc de kä ye tɔ̈ në pïu yiic ku kä ye tɔ̈ në pïu yiic) ku kä ye tɔ̈ në pïu yiic (CAT), pïu yiic (POX), ku pïu yiic (PPO) juak yiic, ku ka ye pïu yiic kaadiäk thiääk kenë pïu yiic juak, PGRvD, PvSOAT, PvD1). Në yekënë cök, ke cɛɛth cï looi në silico yic acï bɛ̈n nyuɔɔth ke nɔŋ mïïth ke SsOAH në S. sclerotiorum genome yic, man ye thöŋ kenë mïïth ke Aspergillus. (PlOAH) në biäk de cɛɛth de luɔɔi, ɣän cï keek tɔ̈ɔ̈u, ku ɣän tɔ̈u nhial. Kë ye kɔc miɛ̈t puɔ̈ɔ̈th apɛi, ee kë cï juak në L-ornithine yic në pïu ke patatith yiic (PDB) acï luɔɔi de SsOAH gene ya tekic në S. Cïmën de, luɔɔi de L-ornithine ee luɔɔi de SsOAH cɔk lɔ piny apɛi në käm yiic cï kek määt yiic në tiim cï kek ya töök yiic. Në thök, ke L-ornithine ee luɔɔi de oxalic acid cɔk lɔ piny apɛi në PDB yic ku në yïïth cï tuany yiic. Në thökde yic, ke L-ornithine ee luɔɔi thiekic looi në gël de redox yic ku jɔl ya gël de tiim cï tuanytuɛɛny yök. Kä cï bɛ̈nbei në ye puɔ̈ɔ̈c kënë yic alëu bïk kɔc ya kony në yïknhial de kä yam, ku jɔl ya dhɔ̈l wën lëu bïk piny ya rac agonë ​​white mold ya mac ku bï kä rɛc ye röt looi në pïïr de bean yic ku jɔl ya mïïth kɔ̈k peei ya cɔk tɔ̈ piiny.
Mold ɣer, ye bɛ̈n në thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r (Lib.) de Bary, ee tuany ë thɔ̈ɔ̈r, ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë pinynhom (Bolton et al., 2006). Sclerotinia sclerotiorum ee töŋ de käm ril yiic apɛi ye tiim yök në tiɔpic bï kek ya mac, ku ka nɔŋ tiim juëc apɛi ke 600 ku ka lëu bïk räl ke tiim ya lac nɔ̈k në dhöl cïï ŋic (Liang ku Rollins, në ruöön de 2018). Në ɣän cïï piath yiic, ke ka ye tëëk në thɛɛr riliic ke pïïrde yic, ku ka ye rëër ke cïn kë loi në thɛɛr juëc yiic ke ye kë col, kë ril, cït kɔ̈th ye cɔl ‘sclerotia’ në tiɔpic ka kë ɣer, ye cil në tiɔpic ka në tiim cï tuanytuɛɛny yök yiic (5.0). S. sclerotiorum ee lëu bï yaaloi cɔl sclerotioc looi, yen ee yen puɔ̈l bï rëër në ɣän cï dɔm yiic në thɛɛ juëc yiic ku bï ya rëër në thɛɛr ke tuany (Schwartz et al., 2005). Sclerotia aye naŋ kä juëc ye kek cam, ku ka lëu bïk ya rëër në tiɔpic në thɛɛ juëc yiic, ku ka ye ya kën tueeŋ yenë tuanytuɛɛny yök në thɛɛr kɔ̈k bï bɛ̈n tueŋ yiic (Schwartz ku kɔc kɔ̈k, 2005). Në ɣän puɔth yiic, ke tiim cɔl sclerotia aye cil ku yekë kä tɔ̈ në aliiric yiic lëu bïk ɣän tɔ̈ nhial kedhiɛ ya dɔm, agut cï tiim, kɔ̈th, ka kɔ̈th ke tiim (Schwartz et al., 2005).
Sclerotinia sclerotiorum ee käjuëc ke tiim ya dɔm ago tiim ya dɔm, ku ye naŋ käjuëc ye röt looi jɔɔk në cil de tiim agut cï cil de tuanytuɛɛny. Në thɛɛr tueeŋ yiic, ke S. sclerotiorum ee käm thii kɔ̈k peei cɔk kääc (ye cɔl ascospores) në kä cït mɛ̈m cɔl apothecia, man ye cath në aliir yic ku cilkë ke ye käm cïï cath në tiim cï tuanytuɛɛny yök yiic (Bolton et al., në ruöön de 2006 yic). Ajuɔk ee oxalic acid bɛ̈i bei, man ye ya kë ye tuanytuɛɛny cɔk loi rot, ago pH de tiim ya mac apath, ku bï rɛ̈l ya cɔk riääk (Hegedus ku Rimmer, në ruön de 2005 yic), ku bï tiim ya cɔk lɔ tueŋ apath. Aciëŋ kënë ee päny de tiim cɔk niɔ̈ɔ̈p, ku ye piny cɔk piath tënë luɔɔi path de käm ye päny de tiim riɔ̈ɔ̈k (CWDEs), ku ye käm puɔ̈l bïk kä ye kek gël ya tiaam ku bïk lɔ në räl yiic (Marciano et al., 1983). Na cï lɔ thïn, ke S. sclerotiorum ee käjuëc ke CWDEs bɛ̈i bei, cïmën de polygalacturonase ku cellulase, man ye kek cɔk tɛkpiny në räl cï tuany yiic ku ye räl cɔk thök. Lɔ tueŋ de tɔ̈ɔ̈u ku tɔ̈ɔ̈u de tɔ̈ɔ̈u de tɔ̈ɔ̈u ee tɔ̈ɔ̈u de tɔ̈ɔ̈u de tɔ̈ɔ̈u ɣer bɛ̈i (Hegedus ku Rimmer, 2005). Në ye thaa kënë yic, ke tiim ye tɔ̈ në tiim yiic aye käm thiääk kenë tuanytuɛɛny ŋic (PAMPs) në dhöl yenë kek ŋic (PRRs), ku ye käjuëc ke tiim cɔk loi röt agokë röt ya tiit apath.
Na cɔk ya run juëc cï tëëk yiic ke luɔɔi yenë tuanytuɛɛny mac, ke liääp de germplasm ye lac tɔ̈ në bean yic ee ŋoot ke tɔ̈ në bean yic, cïmën de mïïth kɔ̈k peei ye kek ɣaac wei, në kë de tuanytuɛɛny ye kek gël, pïïrden, ku jɔl ya tɛ̈n ye kek röt lac gɛɛr në käm yiic. Tɛ̈ yenë tuanytuɛɛny mac thïn ee kë ril yic apɛi ku ka wïc bï ya tɔ̈ ke cï mat, ku nɔŋ käjuëc ye kek looi në ciɛɛŋ yic, ku jɔl ya gël de kä pïr, ku jɔl ya kä ye kɔc nɔ̈k (O’Sullivan et al., 2021). Chemical ye thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r. Ku na yïn ya, ke luɔɔi dït apɛi ku gɛ̈i dït apɛi në wal ke thɔ̈ɔ̈r yiic alëu bï ya tɔ̈ ke ye thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r (Le Cointe ku kɔc kɔ̈k, 2016; Ceresini ku kɔc kɔ̈k, 2024). Në ye mɛn, ke yök de kä kɔ̈k lëu bïk piny ya riɔ̈ɔ̈k acï bɛ̈n ya kë tueeŋ.
Polyamines (PAs), cïmën de pïu ë thäät, pïu ë thäät, pïu ë thäät, ku jɔl ya pïu ë thäät, alëu bïk ya luui ë ke ye dhɔ̈l kɔ̈k peei ye kɔc nɔ̈k në tiɔpic, ku ka lëu bïk luɔɔi de käm rac ya cɔk tɔ̈ piiny apɛi (Nehela ku kɔc kɔ̈k, 2024; Yi20 ku kɔc kɔ̈k, 24 ). Në tiim dït yiic, ke PAs aye luui në käjuëc ke pïïr yiic agut cï, ku ka cie thök në tɛ̈ŋ de käŋ yiic, wuɔ̈ɔ̈cden, ku jɔl ya dhuŋ de nhom de kä pïr ku kä pïr yiic (Killiny ku Nehela, 2020). Alëu bïk ya luui ëke ye kä ye guöp cɔk ril, ku yekë aliir ye guöp cɔk ril (ROS) ya nyaai, ku bïk kä ye guöp cɔk ril ya cɔk tɔ̈ apath (Nehela ku Killiny, 2023), ku bïk kä thiääk kenë guöp ya cɔk tɔ̈ apath (Romero ku kɔc kɔ̈k peei, 2018), ku bïk käjuëc ke aliir ye guöp cɔk ril yiic ya cɔ̈kpiny (Nehela ku Killiny, 2023). Killiny, ruön de 2019), acï ajuiɛɛr ye käm ya gël (SAR) looi, ku bïk rɔ̈mpiny de käm kenë käm ya mac apath. Athiekic bï ya ŋic ke dhɔ̈l yenëke PAs röt luɔɔi thïn ku jɔl ya luɔɔiden në gël de tiim yiic aye wuɔ̈ɔ̈c cï tɛ̈n yenë tiim röt luɔɔi thïn, käm, ku jɔl ya tɛ̈n tɔ̈ kek thïn. PA dït apɛi në tiim yiic aye looi në kä thiekiic ke polyamine L-ornithine (Killiny ku Nehela, 2020).
L-ornithine ee kä juëc looi në cil de tiim ku yïknhial de tiim. Cïmën de, kuɛ̈n thɛɛr acïk nyuɔɔth lɔn në ruth yic (Oryza sativa), ornithine alëu bï ya thiääk kenë ruth ye bɛɛr looi (Liu ku kɔc kɔ̈k, 2018), ruth ë yök, piath ku arm (Lu ku kɔc kɔ̈k, 2020), ku dhuknhom de pïu ë pïu yiic (Yang ku kɔc kɔ̈k, 2020). Në yekënë cök, ke luɔɔi de L-ornithine acï pïu cɔk tɔ̈ në thukar yic (Beta vulgaris) (Hussein ku kɔc kɔ̈k peei, 2019) ku ka cï awai cɔk tɔ̈ piiny në bathɔl yic (Allium Cepa) (Allium Cepa) (Çavuşoǧlu ku Çavuşoǧdacewlu, 2019). Röcä ku kɔ̈k, 2012). Luɔɔi de L-ornithine në gël de käm yiic ee rot looi në kë yenë yen rot määt në tiim cï kek ya tɔ̈ɔ̈u yiic. Cïmën de, ajiëër thiääk kenë mïïth ye kek cam në mïïth yiic, cïmën de mïïth ye mïïth cɔk lɔ tueŋ apath (delta-OAT) ku jɔl ya mïïth ye mïïth cɔk lɔ tueŋ apath (ProDH1 ku ProDH2), acï kek ya lueel wënthɛɛr ëke ye luui në gël de Nicotiana benthamiana ku jɔl ya Arabidopsis Thalianga tënë käm cïï kek ye lac yök. Mïsörë, 2012). Në baŋ dɛ̈t peei yic, ke thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r (ODC) ee wïc bï käm ya cil (Singh ku kɔc kɔ̈k, 2020). Të wïc ODC de Fusärïöm öxïspörum f. sp. lycopersici në dhöl yenë käŋ cɔk biɛt (HIGS) ee tiim ke tomato cɔk ril yiic apɛi tënë Fusarium wilt (Singh ku kɔc kɔ̈k peei, në ruöön de 2020 yic). Ku na yïn ya, ke luɔɔi de ornithine në käm yiic cïmën de käm ye tuanytuɛɛny bɛ̈i në tiim yiic akëc ya puɔ̈ɔ̈c apath. Kë thiekic apɛi, ee kë ye yök në ornithine yic në tuanytuɛɛny yiic ku kä thiääk kenë yen në kä ye röt looi në pïïric ku jɔl ya kä ye röt looi në pïïric, ku ka këc kek ya ŋic apath.
Dɛ̈t benë tuanytuɛɛny ke S. sclerotiorum ya deetic ee kë thiekic apɛi agonë ​​tuanytuɛɛny ya gël. Në ye puɔ̈ɔ̈c kënë yic, ke ɣok aacï wïc buk luɔɔi de diamine L-ornithine ya ŋic ke ye kë thiekic bï tiim ya gël ku bïk ya gël në tuanytuɛɛny ke Sclerotinia sclerotiorum. Ayeku tak ke, në gël de tiim cï tuanytuɛɛny yök yiic, ke L-ornithine ee luɔɔi thiekic looi ëyadɛ̈ në gël de redox yic. Acuk tak lɔnadɛ̈ ke kä lëu bïk röt looi në L-ornithine aye thiääk kenë lööŋ ke gël de käm ku kä cie käm ku gël de kä ye tuanytuɛɛny ke fungal/kä ye kɔc nɔ̈k ku jɔl ya kä thiääk kenë yen. Luɔɔi de L-ornithine ee yen cɔk ye këpath bï ya luui në ajuiɛɛr benë kä rɛc ye röt looi në mold ɣer yic ya nyaai ku bï mïïth ke legume ya cɔk tɔ̈ ëke cïï tuanytuɛɛny ke fungal ya cɔk tɔ̈. Kä cï bɛ̈nbei në ye puɔ̈ɔ̈c kënë yic alëu bïk kɔc ya kony në yïknhial de kä yam, ku jɔl ya dhɔ̈l cïï piny ye riɔ̈ɔ̈k agonë ​​white mold ya mac ku bï kä rɛc ye röt looi në luɔɔi de legume yic ya cɔk tɔ̈ piiny.
Në yee kuɛ̈n kënë yic, kä juëc ye keek ɣaac wei ke bean, Giza 3 (Kë ye cɔl Giza 3), acï luɔ̈ɔ̈i ke ye kën them. Kɔ̈th piɛth aake cï keek bɛ̈i në akutnhom de rïthäc de mïïth ke thäät, Akutnhom de rïthäc de kä ye luɔk në tiɔpic (FCRI), Akutnhom de rïthäc de kä ye puɔ̈ɔ̈r (ARC), Egypt. Kɔ̈th kaa dhiëc aacï keek com në pïu ke lithïk yiic (aciëŋ tɔ̈ thïn 35 cm, aciëŋ tɔ̈ thïn 50 cm) cï thiäŋ në tiɔp cï S. Në nïn kaa 7–10 ke thök ë thök (DPS), ke kɔ̈th aake cï keek tääu piny bïk kɔ̈th kaa rou ke cil thöŋ ku thök ë thök kaa diäk cï röt juak ëbɛ̈n në thök tökic. Tiim cï kek tääu në pïu yiic kedhiɛ aake ye kek tääu në pïu yiic në thaa tökic në wiik kaarou yiic ku ka ye kek tääu në tiim yiic në pɛ̈i yiic në ciin cï lueel tënë tiim cï kek gäm kek.
Ku bï 500 mg/L ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu. Kë cï yök acï tääu në pïu yiic ku luui ë keek në kä kɔ̈k cï ke looi yiic. Në wël lik yiic, ke dhɔ̈l kaa dhetem ke L-örnitïn cï keek tääu në pïu yiic (12.5, 25, 50, 75, 100, ku 125 mg/L) acï keek them në thëm de pïu yiic. Në kë mɛtë thïn, pïu cï liääp ke cïn kë tɔ̈u thïn aake ye keek luɔ̈ɔ̈i ke ye kën ye käŋ gël (Mock) ku wal ke käm ye keek ɣaac wei “Rizolex-T” 50% de pïu cï keek tääu në pïu yiic (toclofos-methyl 20% + thiram 30%; ke ye kë puɔth ye gël. Käk ë ɣɔɔc ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë 2, 4, 6, 8 ku 10 mg/L.
Kä ye nyuɔɔth ke tiim ke bean ku pods ye kä ye nyuɔɔth ke tuaany ɣer nyuɔɔth (ciin de tuaany: 10–30%) aake cï keek määt yiic në dom ke tajiir yiic. Na cɔk kä juëc ke tiim cï tuanytuɛɛny ya yök në käjuëc/käjuëc (käjuëc ye kek ɣaac wei Giza 3), kɔ̈k, cïmën de kä cï kek yök në thuɔ̈k yiic, aake ye kä kuc kek. Kä cï kek määt yiic cï tuanytuɛɛny yök aake cï kek kɔn ya tääu në pïu yiic në 0.5% de sodium hypochlorite në minit ka 3 yiic, ku ka cï kek ya lɔ waak në thɛɛr juëc yiic në pïu cï kek tääu në pïu yiic ku ka cï kek ya lɔɔkic në wereŋ cï kek tääu në pïu yiic ago pïu juëc ya nyaai. Kä cï tuaany dɔm acï keek tɛ̈ɛ̈m në kä thiik yiic tënë räl ciɛɛl (në kaam de räl piɔl ku räl cï tuaany), ku tɛ̈ɛ̈uë keek në pïu yiic ku tɛ̈ɛ̈uë keek në 25 ± 2 °C ke nɔŋ 12 h ë ɣɛɛr/12 h ë col ë nïn ka 5 bïk sclerotia cak. Kueer de mycelial tip aye luɔ̈ɔ̈i ëya dɛ̈t bï käm cï ke tek thook tënë kä cï liääp wala kä cï riääk. Aciëŋ cï juiir acï kɔn ŋic cï tɛ̈n de ciɛɛŋden ku ka cï bɛ̈n yök ke ye S. sclerotiorum cï tɛ̈n yenë kek tïŋ thïn. Në thök, kä cï kek nyaai kedhiɛ aacï kek bɛ̈n them agonë ​​tuanytuɛɛny ya cɔk loi röt në puɔ̈ɔ̈r de bean cɔl Giza 3 ago kä cï kek lueel ke Koch ya yök.
Në ye kënë nhom, ke kë ye lac yök ke ye raan cɔl S. sclerotiorum cï tɛ̈ɛ̈k yic (cï tɛ̈ɛ̈k yic #3) acï bɛ̈n ŋoot ke yök ke cï tɛ̈n cenë ye lueel thïn në White ku kɔc kɔ̈k peei, në ruöön de 1990 yic; Në wël lik yiic, ke kä cï kek tek yiic aake cï kek ya tääu në pïu yiic (PDB) ku ka cï kek ya tääu në 25 ± 2 °C yic në nïn kaa 5–7 yiic. Fungal mycelium acï bɛ̈n määt yiic, ku tɔ̈ɔ̈u në alɛ̈th ke miök yiic, ku lɔɔk keek në door yiic kaarou në pïu cïn yic kërac, ku tɛ̈ɛ̈uë keek në wereŋ cïn yic kërac. DNA de käm acï tek thook në luɔɔi de käm/käm thii cï lac looi (Kuramae-Izioka, 1997; Atallah ku kɔ̈k., 2022, 2024). rDNA de ITS acï bɛ̈n juak në luɔɔi de ITS1/ITS4. Kä cï kek juiir ke PCR aacï kek bɛ̈n ya tuɔɔc agonë ​​kek ya cɔ̈kpiny. ITS rDNA acï kek ya mac kɔ̈ɔ̈th në dhɔ̈l kaarou yiic në luɔɔi de Sanger. Kä cï kek thiëëc yiic aacï kek ya thɔ̈ɔ̈ŋ kenë wël yam cï kek yök në GenBank yic ku jɔl ya të yenë wël ke teknologï ya luɔɔi thïn në BLASTn yic. Kë cï thiëëc acï thɔ̈ɔ̈ŋ kenë kä kɔ̈k kaa 20 ke S. sclerotiorum cï kek yök në wël yam cï kek yök yiic në NCBI GenBank yic. Cɛɛth de cɛ̈k de käŋ acï looi në kueer yenë käŋ thɔ̈ɔ̈ŋ thïn ku jɔl ya tɛ̈n yenë käŋ waar yiic (Nei ku Kumar, në ruöön de 2000 yic). Tim nɔŋ dït apɛi de log-thööŋ aye nyuɔɔth. Tim tueŋ de kë kɔɔr de kä ye yök aye kuany në kuɛ̈ny de tim nɔŋ kä juëc thöŋ ke tim tɔ̈ në kaam de tim thiääk kenë yen (NJ) ku tim dït apɛi (MP). Tim de NJ acï looi ke luui ë kaam de käŋ kaa rou cï yup ke luui ë löŋ de thaa ëbɛ̈n (Nei ku Kumar, 2000).
Kë ye cɔl L-ornithine ku kën ye käm nɔ̈k “Rizolex-T” acï yök në thëm de thëm de thëm de thëm de thëm de thëm de thëm. Dhöl: Löm ë thëm thöŋ ë thëm ë thëm ë L-ornithine (500 mg/L) ku liääp ë thëm ë 10 ml ë PDA ë thëm ë thëm ë thëm ë thëm ë 12.5, 25, 50, 75, 100 ku 125 mg/L, ë tök. Käŋ kaadhiëc ke pïu cï keek tääu në pïu yiic cï keek tääu në pïu yiic (2, 4, 6, 8 ku 10 mg/L) ku pïu cï keek tääu në pïu yiic cï keek tääu në pïu yiic aacï keek luɔ̈ɔ̈i ke ye kën ye keek gël. Na cï kë tɔ̈ thïn thök, ke kë cï looi në thɛɛr ke tɔ̈c yiic, nɔŋ 4 mm në ciɛɛlde yic, acï lɛɛr në ciɛɛl de kë yenë käŋ tääu thïn yic ku tɛ̈ɛ̈uë në 25±2°C agut cï bï kë yenë käŋ tääu thïn ëbɛ̈n ya thiɔ̈ɔ̈ŋ, ku të cïnë dït de käm ya gɔ̈t. Yup ciin de bɔɔtic yenë dït de S. sclerotiorum gël në luɔɔi de kë ye yup 1:
Thɛ̈m acï dhuɔ̈kpiny naa rou, keke käŋ kaa dhetem ke kä pïr cï dhuɔ̈kpiny tënë akutnhom de gël/thëm ku käŋ kaa dhiëc (tiim kaa rou në kë tökic) tënë kä cï dhuɔ̈kpiny ke kä pïr. Aye kë cï dhuɔ̈kpiny de kä pïr acï caath naa rou (kä cï dhuɔ̈kpiny kaa rou ke tëët) bïk yith, gäm ku bï kä cï bɛ̈n bei tën käke nyooth nyuɔɔth. Në ye kënë yic, ke thööŋ de thööŋ de kä cï röt looi acï looi bïnë thööŋ de kä cï röt looi në thɛɛr juëc yiic (IC50) ku IC99 (Printic, 1976) yup.
Acän ba riɛl de L-ornithine tïŋ në ɣän ke ɣön ë tiim yiic, käŋ kaa rou cï röt gɛɛi ke thëm de käŋ acï keek looi. Në wël lik yiic, ke käŋ cï kek thiɔ̈ɔ̈ŋ në tiɔp cï liɛɛt looi (3:1) ku ka cï kek ya tääu në tiɔp yam cï looi yic. Kë tueeŋ, ee kë ye lac yök në S. sclerotiorum yic (kë cï tek yic #3) acï puɔ̈ɔ̈c në tɛ̈ɛ̈m de kë thiin koor në biäk, ku tɛ̈ɛ̈uë ye nyin piny në PDA yic ku tɛ̈ɛ̈uë në 25°C në cool yic (24 h) në nïn kaa 4 ago cil de mycelial ya cɔk loi rot. Käŋ kaa ŋuan nɔŋ 5 mm dït apɛi aacï keek lööm në thök tueŋ ku tɛ̈ɛ̈uë keek në 100 g de kë cï liääp ke rap ku ruth (1:1, v/v) ku kä cï keek tääu në pïu yiic kedhie aacï keek tääu në 25 ± 2 °C cök në 12 h de ɣɛɛr/12 h de col bï 5 cɔk loi rot. Kä tɔ̈ në flasks yiic kedhiɛ aake cï kek ya liääp apath agokë ya thöŋ ke këc tiɔp ya juak thïn. Ku, 100 g de mɛ̈ɛ̈t de bran cï liääp acï mat në thän tökic ago käm ya tɔ̈ ke cïn kë ye kek gël. Kä cï kek tääu në pïu yiic aake ye kek tääu në pïu yiic agokë cil de fungal ya cɔk loi rot ku ka cï kek ya tääu në ɣän ke tiim yiic në nïn ka 7 yiic.
Kɔc kaa dhiëc ke Giza 3 wääc aacï keek com në thän tökic. Në thön cï keek looi në L-ornithine ku thön cï keek nɔ̈k ke Rizolex-T, ke kɔ̈th cï keek tɔ̈ɔ̈u aake cï keek kan tääu në pïu yiic në thɛɛr kaa rou në pïu yiic ke käŋ kaa rou ke IC99 ë thök ë 250 mg/L ku 50 mg/L, ë ke thöŋ, ku ka cï keek tääu në aliiric ke këc thök në thaa tök. Në baŋ dɛ̈t peei yic, ke kɔ̈th aake cï kek ya tääu në pïu cï kek tääu në pïu yiic ke ye kë bï kek ya gël. Në nïn ka thiäär yiic, ke pïu tueŋ këc bɛ̈n, ke kɔ̈th aake cï keek tääu piny, ku ŋoot ke nɔŋ kɔ̈th kaarou ëke cï keek tääu në thäät yiic. Në ye kënë nhom, agonë ​​tuanytuɛɛny ke S. sclerotiorum ya yök, ke tiim ke bean në thɛɛr thöŋ ke yïknhial de tiim yiic (nïn kaa 10) aake ye kek tɛm në ɣän wääc yiic kaarou në luɔɔi de scalpel cïn yic käm ku thööŋë ke ye 0.5 g de kë cï liääp ke bran cï liääp acï tääu në tɔ̈ɔ̈k tökic, ku kuanycök në ajuɛɛr de yïknhial de tuanytuɛɛny kedhiɛ. Tiim cï kek mac aake cï kek ya tɔ̈ɔ̈k ku thöŋkë (0.5 g) në kë cïn yic kërac, cï liääp ke bran cï kek ya tääu në tɔ̈ɔ̈k yic ku ka ye kek tɔ̈ɔ̈u në pïu yiic ago piny ya thɔ̈ɔ̈ŋ agonë ​​tuanytuɛɛny ya cil ku bïk ya thöŋ në kaam de akuɔ̈tnhïïm ye kek töök yiic.
Dhöl ë töök: Käk ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät. Kä cï keek mac në placebo aake ye keek tääu në 500 ml de pïu cï keek tääu në pïu yiic. Käk ë töök ëbɛ̈n aake cï ke looi në ɣän ke ɣön ë tɔ̈ɔ̈u (25 ± 2°C, 75 ± 1% ë tɔ̈ɔ̈u ë pïu, ku thɛɛr ke 8 h ë ɣɛɛr/16 h ë col). Käk ëbɛ̈n aake ye keek tääu në pïu yiic në wiik kaa rou ku ka ye keek looi në pɛ̈i yiic keke pïu cï thɔ̈ɔ̈ŋ ke NPK (20-20-20, ke nɔŋ 3.6% de pïu ë thäät ku TE; Ke këc lueel, ke yïïth cï dït apɛi (yïïth ke rou ku diäk tɔ̈ nhial) aake cï kek määt yiic në thɛɛr ke 72 h yiic të cenë kek ya töök (hpt), cï kek ya määt yiic, ku cï kek ya tɔ̈ɔ̈u në -80 °C agonë ​​kek ya bɛɛr caath, ku ka cïï thök në, tɛ̈n yenë kek yök thïn. ku kä cïï thöŋ ke kä ye guɔ̈p gël ku kä ye guɔ̈p nyuɔɔth.
Tɛ̈n yenë tuanytuɛɛny ɣer yök thïn aye kek them në nïn kaa 21 yiic të cïnë wal ya tääu në kɔc kɔ̈k yiic (dpi) në thëm de 1–9 (Kë cï juak thïn në thëm de S2) cï tän cenë ye luɛɛl thïn në thëm de Petzoldt ku Dickson (në ruöön de 1996) cï looi në raan cɔl Teran ku kɔc kɔ̈k peei. (2006). Në wël lik yiic, ke tiim ku yïth ke tiim aake ye kek caath në thɛɛr ɣɔn cenë kek ya tääu thïn agokë tɛ̈n cenë kek ya luɔɔi thïn ya kuanycök. Kaam de tɔ̈ɔ̈k tënë të cïnë tɔ̈ɔ̈k tääu thïn agut cï të mec apɛi në tɔ̈ɔ̈k ka tɔ̈ɔ̈k yiic acï them ku thööŋ de 1–9 acï tääu të tɔ̈u tɔ̈ɔ̈k thïn, të cïnë (1) nyuɔɔth ke cïn kë ye tïŋ thiääk ke të cï tɔ̈ɔ̈k thïn ku (2–9) acï nyuɔɔth ke tɔ̈ɔ̈k acï rot juak amääth në dït de tɔ̈ɔ̈k yic a/S2). Riɛl de tuanytuɛɛny ɣeer acï waar në ciin de bɔɔtic në luɔɔi de kueer de 2:
Në kë mɛtë thïn, të tɔ̈u tën lɔtueŋ tuaany cök (AUDPC) acï yup ke luï kuer (Shaner ku Finney, 1977), cï piac yök tënë rot ɣeer de rɛ̈c ye lac yök (Chauhan ku kɔ̈k., 2020) ke luï kë ye yup 3:
Të nɔŋ Yi = dït de tuaany në thaar ti, Yi+1 = riɛl de tuaany në thaar dɛ̈t ti+1, ti = thaar de thëm tueŋ (në nïn), ti+1 = thaar de thëm dɛ̈t (në nïn), n = ciin de thaar cï yök wala ɣän cï tïŋ. Kä ye cil de tim de bean nyuɔɔth agut cï bɛ̈ɛ̈r de tim (cm), ciin de yïth ke tim tökic, ku ciin de yïth ke tim tökic aake ye kek gɔ̈t në wik yiic në nïn kaa 21 në kä cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ kedhiɛ yiic.
Në thää ke biological yiic, ke kä cï kek yök në yïth yiic (yïïth ke rou ku diäk cï kek cak ëbɛ̈n në nhial) aake cï kek ya määt yiic në nïn kaa 45 ke töök cï looi (nïn kaa 15 ke töök cï thök). Töŋ de kä cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ ke biology anɔŋic käŋ kaadhiëc (tiim kaarou në käŋ yiic). Agut cï 500 mg de rɛ̈l cï thɔ̈ɔ̈r aye luɔ̈ɔ̈i bïnë kä ye pïu cɔk bɔ̈ bei (kä ye pïu yök në pïu yiic a, pïu ye pïu yiic b ku pïu yiic) ke luui 80% de acetone në 4 °C në cool yic. Në thɛɛr kaa 24 yiic, kä cï kek them aacï kek ya tääu në pïu yiic ku kä cï kek yök në pïu yiic aacï kek ya määt yiic agonë ​​käjuäc ke tiim ya yök në tiim yiic, ku jɔl ya käjuäc ke tiim yiic në luɔɔi de UV-160A yenë käŋ them në UV-160A (Akutnhom de Shimadzu Corporation, Japan) cïmën de kueer de thëm de pïu (A470, A646 ku A663 nm). Në yecök ciɛ̈ɛ̈n, ke kä tɔ̈ në pïu yiic aye kek yup në dhɔ̈l käk yiic kaa 4–6 cï kek kiɛ̈ɛ̈t në raan cɔl Lichtenthaler (në ruöön de 1987).
Në thaa 72 h ke töök cï looi (hpt), yïïth (yïth ke rou ku yïïth ke diäk cï röt looi nhial) aake cï keek määt yiic tënë kä cï röt dhuɔ̈kpiny ke kä pïr yiic agokë ya tɔ̈ në ɣän ke pïu yiic (H2O2) ku jɔl ya pïu yiic (O2•−). Töŋ de kä cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ ke biology anɔŋic käŋ kaadhiëc (tiim kaarou në käŋ yiic). Töŋ de kä cï kek dhuɔ̈kpiny ke biological acï kek ya caath në käŋ kaarou yiic (käŋ kaarou cï kek dhuɔ̈kpiny në teknologï yic) agonë ​​yith ya nyuɔɔth, bïk ya gam ku bïk ya bɛɛr dhiëëth në ye luɔɔi kënë yic. H2O2 ku O2•− aacï keek yök ke luui 0.1% 3,3′-diaminobenzidine (DAB; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany) wala nitroblue tëtrazolium (NBT; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany), ë ke thöŋ, kuany kuɛɛr cï keek lueel në Romeer-P cök. (2004) ku Adam ku kɔc kɔ̈k. (1989) kenë kä thiik cï kek cɔ̈kpiny. Në kë de tɔ̈c de H2O2 në ɣän tɔ̈ yen thïn, ke kä thii cï kek tääu në pïu yiic aake cï kek ya tääu në 0.1% de DAB yic në 10 mM de Tris (pH 7.8) ku ka cï kek ya tääu në atuɔ̈c de ɣöt yic në ruɛl yic në thaa 60. Aciëŋ ë pïu ë 0.15% (v/v) TCA ë 4:1 (v/v) ëthanöl:klöroform (Al-Gomhoria Pharmaceutics ku Käk ë Wal, Cairo, Ijip) ku ka cï keek tääu në ruɛl yic agut cï bïk col. Cïmën de, kä yenëke pïu tääu thïn aake cï kek ya tääu në pïu yiic në 10 mM de pïu yiic (pH 7.8) nɔŋic 0.1 w/v % HBT agonë ​​O2•− ya tääu në ɣänken yiic. Kä cï keek tääu në pïu yiic aake cï keek tääu në ruɛl yic në thɛɛr ke 20 min, ku ka cï keek tääu në pïu yiic cït mɛn tɔ̈ yen nhial, ku ka cï keek tääu në pïu yiic agut cï bïk pïu col/violet bɛ̈n. Kë dït de kë cï bɛ̈n bei thïn ee kë ɣer (cït mɛn de kë ye H2O2 nyuɔɔth) wala kë ye ɣer-kïït (cït mɛn de kë ye O2•− nyuɔɔth) kïït acï them në luɔɔi de Fiji de kë cï looi de thura cï looi në ThuraJ (http://fiji.sc; cï yök në 7 Pɛnëdiäk 2024).
Malondialdehyde (MDA; ke ye kë ye pïu cɔk tɔ̈ në pïu yiic) acï yök në kueer de Du ku Bramlage (1992) ke cï waar amääth. Yïth ke mïïth ke pïr ëbɛ̈n (yïth ke rou ku diäk cï röt cak ëbɛ̈n në nhial) aake cï keek määt yiic në 72 h ë thök de töök (hpt). Töŋ de kä cï kek dhuɔ̈kpiny në biology yic anɔŋic thön kaadhiëc (tiim kaarou në thön tökic). Töŋ de kä cï kek dhuɔ̈kpiny ke biological acï kek ya caath në käŋ kaarou yiic (käŋ kaarou cï kek dhuɔ̈kpiny në teknologï yic) agonë ​​yith ya nyuɔɔth, bïk ya gam ku bïk ya bɛɛr dhiëëth në ye luɔɔi kënë yic. Në wël lik yiic, ke 0.5 g de tiim tɔ̈ piiny acï ya luui në MDA yic kenë 20% de trichloroacetic acid (TCA; Kë tɔ̈u në MDA yic në kë cï tääu nhial yic acï yök në thëm de kë ye lööm në 532 ku 600 nm në luɔɔi de kën yenë käŋ tïŋ në UV-160A (Akutnhom de Shimadzu, Japan) ku ka cï lueel ke ye nmol g−1 FW.
Në thëm de kä cïï thöŋ ke kä ye tɔ̈ në pïu yiic ku kä ye tɔ̈ në pïu yiic, ke tiim (yïïth ke rou ku tiim ke diäk cï röt cak ëbɛ̈n në nhial) aake cï kek määt yiic në thɛɛr ke 72 h ke tɔ̈ɔ̈u (hpt). Töŋ de kä cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ ke biology anɔŋic käŋ kaadhiëc (tiim kaarou në käŋ yiic). Ayï kä ye nyuɔɔth ke käke pïr aacï keek caath në kä juëc (käŋ kaa rou ke käke tëët). Yïth kaa rou aake cï keek tääu piny kenë pïu ke nitrogen ku ka ye kek luɔ̈ɔ̈i agonë ​​kä ye guöp cɔk ril ku kä cïï guöp ye lac cɔk ril ya yök, amino acids kedhiɛ, käjuëc ke proline, tɛ̈n yenë käŋ röt luɔɔi thïn, ku jɔl ya käjuëc ke oxalate.
Kä cï röt lac liääp kedhiɛ aacï kek ya yök në luɔɔi de Folin-Ciocalteu reagent (Sigma-Aldrich, St. (1999). Në wël lik yiic, ke thööŋë ke ye 0.1 g de rɛ̈l ke tiim cï kek määt yiic acï bɛ̈n nyaai në 20 ml 80% de methanol në cool yic në thaa 24 h ku kë cï bɛ̈nbei thïn acï bɛ̈n määt yiic të cenë yen tääu në pïu yiic. 0.1 ml ë thëm ë thëm acï liääp ke 0.5 ml ë thëm ë thëm (10%), acï thɔ̈ɔ̈r ë 30 s ku tɛ̈ɛ̈u ë thëm ë 5 min. Ku 0.5 ml de 20% de pïu ë pïu ë pïu ë pïu (Na2CO3; Al-Gomhoria ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë 1 h. Të cïnë ye tääu në pïu yiic, ke pïu cï kek liääp aye them në 765 nm në luɔɔi de UV-160A yenë käŋ tïŋ në pïu yiic (Akutnhom de Shimadzu, Japan). Ciin de kä ye lac liääp në kä cï kek them yiic aacï kek ya yök në luɔɔi de thëm de kä cï röt gɔ̈ɔ̈r yiic (Kɔc ŋic käŋ, NH, USA) ku ka ye kek lueel ke ye milligrams ke kä cï röt tääu në pïu yiic thöŋ në gram de thiɛk yam (mg GAE g-1 thiɛk yam).
Kë cï yök në pïu yiic ëbɛ̈n acï yök në kueer de Djeridane ku kɔc kɔ̈k. (2006) ke nɔŋ kä thiik cï keek cɔ̈kpiny. Në wël lik yiic, ke 0.3 ml de kë cï yök në methanol yic acï liääp kenë 0.3 ml de 5% de kë cï yök në pïu yiic (AlCl3; (Al-Gomhoria Käk ë Wal ku Käk ë Wal, Cairo, Ijip), acï liääp apɛi ku tääu ë pïu ë ɣöt ë 30 min ë muɔ̈ɔ̈th. Të cïnë ye tääu në pïu yiic, ke pïu cï kek liääp aye them në 430 nm në luɔɔi de UV-160A yenë käŋ tïŋ në pïu yiic (Akutnhom de Shimadzu, Japan). Kë cï yök në kä cï keek yök yiic në kä cï keek yök yiic acï keek yök në luɔɔi de thëm de rutin (TCI America, Portland, OR, USA) ku ka cï keek lueel ke ye milligrams ke rutin thöŋ në gram de thëm yam (mg RE g-1 thëm yam).
Ciin de amino acid tɔ̈ në yïïth ke rap yiic acï ya yök në luɔɔi de kä cï kek cɔ̈kpiny në dhöl cï Yokoyama ku Hiramatsu (2003) lueel ku cï kek cɔ̈kpiny në Sun et al. (2006). Në wël lik yiic, ke 0.1 g de rɛ̈l tɔ̈ piiny acï bɛ̈n nyaai kenë pH 5.4 buffer, ku 200 μL de kë tɔ̈ nhial acï bɛ̈n yök kenë 200 μL de ninhydrin (2%) ku 200 μL de pyridine (10%; thëm ë 580 nm ke luui ë thëm ë thëm ë thëm ë thëm (Akutnhom de Shimadzu, Japan). Në baŋ dɛ̈t, ke proline acï yök në kueer de Bates (Bates ku kɔc kɔ̈k, 1973). Proline acï bɛ̈ibei kenë 3% de käm cï kek tääu në pïu yiic (Thërmo Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA) ku të cïnë kek tääu në pïu yiic, ke 0.5 ml de kë cï yök në pïu yiic acï liääp kenë 1 ml de pïu cï liääp kenë pïu yiic. në 520 nm ke luui kë thöŋ de thëm de kä ye tïŋ nhial. Aciëŋ de amino acids ku proline tɔ̈ në tiim yiic aake cï kek ya yök në luɔɔi de glycine ku proline cï kek them yiic (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), ku ka cï kek ya lueel ke ye mg/g de thëm yam.
Ku bï luɔɔi de kä ye guöp cɔk ril yiic ya ŋic, ke 500 mg de räl cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ acï kek ya nyaai në 3 ml de 50 mM Tris buffer (pH 7.8) nɔŋic 1 mM EDTA-Na2 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), cï tääu në 10,000 × g yic në minit kaa 20 në kë yenë käŋ liɛɛr yic (4 °C), ku kë cï tääu në pïu yiic (kë cï bɛ̈nbei në pïu yiic) acï määt yiic (El-Nagar ku kɔc kɔ̈k, 2023; Osman ku kɔc kɔ̈k, 2023). Catalase (CAT) acï thök ë 2 ml ë 0.1 M ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu (pH 6.5; Sigma-Aldrich, St. 2023; Ɣöthman ku kɔc kɔ̈k, 2023). Kä ye röt gɛɛi në pïu yiic (POX) acï kek yök në dhöl de Harrach ku kɔc kɔ̈k. (2009). (2008) kenë kä thiik cï kek waar yiic (El-Nagar ku kɔc kɔ̈k, 2023; Osman ku kɔc kɔ̈k, 2023) ku luɔɔi de pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu (PPO) acï yök ke cï thök ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu (pH 6.0l). Pɔ̈rtländ, OR, USA) ku 100 μl de 12 mM H2O2. Kuer ë luɔi acï waar amääth tënë (El-Nagar ku kɔc kɔ̈k, 2023; Osman ku kɔc kɔ̈k, 2023). Thëm acï looi të cïnë 3 ml de kë cï yök ke catechol yök (0.01 M) cï looi në 0.1 M de kë cï tääu në pïu yiic (pH 6.0). Luɔɔi de CAT acï them në tïŋ de thök de H2O2 në 240 nm (A240), luɔɔi de POX acï them në tïŋ de juɛ̈k-juɛ̈k de pïu në 436 nm (A436), ku luɔɔi de PPO acï them në gɛ̈t de pïu cï röt waar në 495 nm (A4095). thëm de kä ye ɣɛɛr nyuɔɔth (Sïmädhï, Jäpän).
RT-PCR në thaar yic acï luɔ̈ɔ̈i bïnë kä cï gɔ̈t ke käŋ kaa diäk thiääk kenë kä ye guɔ̈p gël yök, nɔŋiic kä ye guɔ̈p cɔk ril yiic (PvCAT1; Namba de Gën de Käke KF033307.1), kä ye Keek Gɔ̈t de Käm (PvSOD; Käke Gɔ̈t de Käke Luɔɔi), ku Gr63955. 195009.1), në tïïm ke bean yiic (tïïm ke rou ku diäk cï keek cak ëbɛ̈n në nhial) 72 h ë thök de töök cï thök. Në wël lik yiic, ke RNA acï ya tek thook në luɔɔi de kë yenë RNA nyaai në dhöl thiin koor yic (Cat. No. BSC52S1; Ku, cDNA acï looi në TOP scriptTM cDNA Cït cït mɛn cïnë raan ë loi yeen ye lueel. Tɛ̈n yenë genes kaadiäk tɔ̈ nhial ëtënë ya cɔ̈kpiny në Table S3 yic. PvActin-3 (namba de yök de GenBank: XM_068616709.1) aye luɔ̈ɔ̈i ke ye kën ye käŋ muk ɣöt ku kä thiääk kenë käŋ aye keek yup në kueer de 2-ΔΔCT (Livak ku Schmittgen, 2001). Tɛ̈n yenë Actin rëër thïn në thɛɛr ke tɔ̈c yiic (kë cïï thöŋ në kaam de kä ye lac yök ku kä ye lac yök në tiim yiic) ku kä ye röt looi në thɛɛr ke tɔ̈c yiic (cït piny, pïu ë pïu yiic, atuɔ̈c tɔ̈ piiny) acï keek nyuɔɔth (Borges et al., 2012).
Acï thɛɛr kɔn looi në thëm de kä ye yök në mïïth yiic në S. Në wël lik yiic, ɣok acï OAH luɔ̈ɔ̈i tënë Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; taxïde: 1191702; namba de yök de GenBank XP_040799428.1; 342 amino acids) ku Penicillium lagena (PlOAH2; namba de yök de GenB1: 9; XP_056833920.1; 316 kä ye cam yök) cït mɛn de thiɛ̈c bïnë kä thöŋ ke käm tɔ̈u në S. sclerotiorum yic nyuɔɔth. BLASTp acï looi tënë kä cï piac bɛ̈n yök ke S. sclerotiorum genome në GenBank në wɛbthait de wël ke teknologï de käŋ yiic (NCBI).
Në yekënë kɔ̈u, ke kä cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ ke OAH tënë SsOAH ku jɔl ya tɛ̈n cenë kek ya caath thïn ku jɔl ya tɛ̈n cenë kek ya caath thïn në tiim kɔ̈k peei yiic. thööŋ (Jön ku kɔc kɔ̈k, 1992). Tim de phylogenetic acï mat kenë kä juëc cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ ke mïïth cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ kedhiɛ ke OAH genes (SsOAH) tënë S. sclerotiorum ku jɔl ya thiɛ̈c cï kek ya thiëëc në luɔɔi de kä cï kek tääu në käŋ yiic (COBALT; ku Agarwala, 2007). Në yekënë kɔ̈u, ke kä thöŋ kenë amino acid ke SsOAH tënë S. sclerotiorum aacï kek ya tääu në kä cï kek thiëëc yiic (AfOAH ku PlOAH) (Larkin ku jɔl ya kɔc kɔ̈k peei, në ruöön de 2007 yic) në luɔɔi de ClustalW. Kën ë luɔi ë ESP (thëm 3.0; ë thäät ë thäät/ë thäät ë thäät).
Në yekënë cök, ke ɣän cï kek thɔ̈ɔ̈ŋ ke ye luɔɔi de S. sclerotiorum SsOAH acï kek ya tek yiic në akuɔ̈tnhïïm wääc yiic në luɔɔi de adit ke InterPro (Blum ku jɔl ya kɔc kɔ̈k peei, 2021). Në thök, käŋ kaa diäk (3D) cï ke looi ke thööŋ de S. sclerotiorum SsOAH acï looi ke luui ë thëm de kä ye cam/thɔ̈ɔ̈ŋ de kä ye cam (Phyre2 kën ye käŋ tɔ̈ɔ̈u 2.0; 2015) ku acï yök ke luui ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät (Biasini ku kɔc kɔ̈k, 2014). Kä cï keek thɔ̈ɔ̈ŋ ke tɔ̈u në dhɔ̈l kaa diäk yiic (luɔɔi de PDB) aacï keek tïŋ në thööŋ de kä cï keek looi ke UCSF-Chimera (kë cï looi 1.15;
Kë ye yök në thaar yic de PCR acï luɔ̈ɔ̈i bïnë kä ye röt looi ke oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH; namba de yök de GenBank: XM_001590428.1) yök në kä ye röt looi yiic. Në wël lik yiic, ke S. sclerotiorum acï bɛ̈n tääu në kë yenë käŋ liääp yiic ku ka cï bɛ̈n tääu në kë yenë käŋ liääp yiic në 25 ± 2 °C në thaa 24 h në 150 rpm ku në cool yic ago cil ya cɔk cil. Në ye mɛn, ke mïïth aacï kek ya tɔ̈ɔ̈u në L-ornithine ku jɔl ya tɔ̈ɔ̈u de mïïth ke Rizolex-T në thök de IC50 yic (ye thɔ̈ɔ̈ŋ ke ye 40 ku 3.2 mg/L, në thɛɛr kɔ̈k yiic) ku ka cï kek ya tɔ̈ɔ̈u në thɛɛr kɔ̈k ke 24 h në thɛɛr thöŋ yiic. Të cïnë kek tääu në pïu yiic, ke ciɛɛŋ acï bɛ̈n ya tääu në 2500 rpm yic në minit ka 5 yiic ku kë cï bɛ̈nbei thïn (mycelium de käm) acï ya määt yiic agonë ​​kä ye röt looi ya deet yiic. Cïmën de, mɛ̈c de fungal acï bɛ̈n määt yiic në 0, 24, 48, 72, 96, ku 120 h wën cïnë tuanytuɛɛny yök tënë tiim cï tuanytuɛɛny yök cï mɛ̈c ɣer ku mɛ̈c cït cotton looi në tiim cï tuanytuɛɛny yök yiic. RNA acï bɛ̈ibei tënë käm ku cDNA acï bɛ̈n looi cïmën cenë ye lueel nhial ëtënë. Kä yenëke SsOAH mac kɔ̈ɔ̈th aye kek gɔ̈t në Table S3 yic. SsActin (GenBank namba de yök de käŋ: XM_001589919.1) aye luɔ̈ɔ̈i ke ye kën ye käŋ muk ɣöt, ku kä thiääk kenë käŋ aye keek yup në kueer de 2-ΔΔCT (Livak ku Schmittgen, në ruöön de 2001).
Oxalic acid acï yök në pïu ke patatith yiic (PDB) ku kä cï kek yök në tiim yiic nɔŋiic käm cï kek yök në dhöl de Xu ku Zhang (2000) ke cï kek cɔ̈kpiny amääth. Në wël lik yiic, ke S. sclerotiorum cï kek nyaai acï kek ya tuɔɔc në kä ye kek tääu në pïu yiic ku ka cï kek ya tääu në adit yiic (cïmën de I2400, në 150 rpm në 25 ± 2 °C agut cï nïn kaa 3–5 në g 4). Na cï tɔ̈ɔ̈u, ke ciɛɛŋ de käm acï kɔn ya cam në wereŋ de Whatman #1 yic ku ka cï bɛ̈n ya tääu në 2500 rpm yic në minit kaa 5 ago kä cï döŋ ya nyaai. Kë cï bɛ̈n bei thïn acï määtiic ku tɔ̈ɔ̈u tën 4°C bï kä juëc ke oxalate yök. Në juiir de kä ye nyuɔɔth ke tiim, ke thööŋë ke ye 0.1 g de kä cï riääk ke tiim acï keek nyaai në thɛɛr kaa diäk ke pïu cï keek tääu në pïu yiic (2 ml në thɛɛr yiic). Kä cï them aacï keek tääu tëde 2500 rpm në 5 min, kë cï bɛ̈n bei thïn acï riɛl ku tɔ̈ɔ̈u në wereŋ de Whatman No. 1 ku mɛ̈ɛ̈të yic bï keek bɛɛr caath.
Në thööŋ de kä juëc ke pïu cï liääp, kë cï liääp acï looi në kë cï tääu në pïu yiic në kueer kënë yic: 0.2 ml de kë cï them (wɛ̈lɛ̈/ka PDB cï looi në ciɛɛŋ wala pïu cï liääp ke pïu cï liääp), 0.11 ml de kë ye cɔl bromophenol ye maalak (BPB, 1 mM; Acïd (H2SO4; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Egypt) ku 0.176 ml ë 100 mM pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë 4.8 ml në pïu ë 60 °C. Në minit ka 10 yiic, ke thök ë luɔi acï thök në 0.5 ml de pïu ë pïu ë pïu ë pïu (NaOH; 0.75 M). Kë ye yök (A600) de kë cï liääp ke kë cï yök acï them në 600 nm në luɔɔi de kën ye käŋ tïŋ në UV-160 (Akutnhom de Shimadzu, Japan). PDB ku pïu cï keek tääu në pïu yiic aake ye keek luɔ̈ɔ̈i ke ye kën ye käke ciɛɛŋ mac ku käke tiim, në tök. Kë ye cɔl oxalic acid tɔ̈ në kä cï kek juiir yiic, aye kek lueel ëke ye kä thi kor ke acid në mililiter de PDB yic (μg.mL−1), ku në kä cï kek bɛ̈ibei në yïth yiic, aye kek lueel ke ye kä thi kor ke acid në gram de thiɛk yam yic (μg.g. MA, Amerïka).
Në kuɛ̈n yic, käke nyooth abɛ̈n aacï keek looi në kueer cï looi abɛ̈n (CRD) keke käŋ kaa dhetem ke kä pïr cï dhuɔ̈kpiny në töök ku käŋ kaa dhiëc ke kä pïr (tiim kaa rou në kë cï looi) ee naa cï lueel dɛ̈t. Kä cï röt dhuɔ̈kpiny ke Biological aacï kek ya caath në dhɔ̈l juëc yiic (käŋ kaarou cï kek dhuɔ̈kpiny në teknologï yic). Kä cï dhuɔ̈kpiny ke tëët aake ye keek luɔ̈ɔ̈i bïkë kä ye röt dhuɔ̈kpiny tïŋ ku kaa këc keek luɔ̈ɔ̈i në cïïtë yic de käke kuɛ̈n bï kä ye dhuɔ̈kpiny ke cie yith nyaai. Kä cï yök aacï keek caath në thööŋ de kä wääc (ANOVA) ku kuanycök në Tukey-Kramer në yic de kä wääc thiekiic (HSD) thëm (p ≤ 0.05). Në käke luɔɔi cï looi në vitro yic, käke IC50 ku IC99 aacï keek yup ke luui löŋ de probit ku 95% de käke gäm cï keek yup.
Kä cï keek tek yiic kaa ŋuan aacï keek määt yiic në ɣän wääc ke thäät yiic në El Ghabiya, Egypt. Në PDA yic, ke kä cï kek tek yiic kedhiɛ aye micelium ɣer bɛ̈n cak man ye lac wel ke ye ɣer cïmën de cotton (Thoŋ de 1A) ku jɔl ya kë ɣer ka ye ɣer në thɛɛr ke sclerotium yiic. Sclerotia aye lac dït, col, thöŋ ke thöŋ wala thöŋ ë thöŋ, 5.2 agut cï 7.7 mm bɛ̈ɛ̈r ku 3.4 agut 5.3 mm dït (Thiɛ̈ŋ 1B). Na cɔk käŋ kaaŋuan cï kek tek yiic ya cak në thök de ciɛɛŋ yic në nïn kaa 10–12 cï kek ya tääu në 25 ± 2 °C yic (Thiɛ̈ŋ de 1A), ke ciin de kä cï kek tek yiic në thän tökic acï bɛ̈n ya wuɔ̈ɔ̈c apɛi në ke yiic (P < 0.001), kenë ciin de kä cï kek tek yiic ±301). 1.53 sklërötïä për plätë; Cïmën de, kë cï tek yic #3 acï käjuëc ke oxalic acid bɛ̈n looi në PDB yic awär kä kɔ̈k cï kek tek yiic (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; Thura 1D). Isolate #3 acï kä ye röt looi nyuɔɔth ku kä ye tïŋ në kä thiik yiic ke käm ye tuanytuɛɛny bɛ̈i. Cïmën de, në PDA yic, ke akuɔ̈tnhïïm ke #3 acï lac cil, aake ye ɣeer cït man de pïu (Thiɛ̈ŋ 1A), aye ɣeer ku ɣeer thith, ku ka ye wïc nïn kaa 6-7 në 25 ± 2°C agokë piny de 9 cm dïtde ya kum. Cï tɛ̈n cenë ye luɛɛl thïn në tɛ̈n yenë käŋ tïŋ thïn ku jɔl ya tɛ̈n yenë käŋ tïŋ thïn, ke kë cï tek yic #3 acï ya yök ke ye cɔl Sclerotinia sclerotiorum.
Thura 1. Kä ye röt looi ku kä ye tuanytuɛɛny ke S. sclerotiorum yök në mïïth ke thäät yiic. (A) Dït de mycelial de käŋ kaaŋuan cï kek tek yiic në PDA yic, (B) ciin de käŋ kaaŋuan cï kek tek yiic, (C) ciin de käŋ (në thän tökic), (D) tɔ̈c de oxalic acid në PDB yic (μg.mL−1), ku (E) tuanytuɛɛny ke S. lëu bï ya yök ke ye puɔ̈ɔ̈r në mïïth ke Giza 3 në ɣän ke ɣön ë tiim yiic. Kä thöŋ aye tɔ̈u ke ye kën thööŋë ± SD de käŋ kaa dhiëc ke kä pïr cï röt dhuɔ̈kpiny (n = 5). Athör wääc aye thööŋ de thööŋ de thööŋ nyuɔɔth në kaam de töök (p < 0.05). (F–H) Kä ye nyuɔɔth ke tuanytuɛɛny ɣeer aye röt nyuɔɔth në tiim tɔ̈ nhial ku në tiim yiic, në nïn kaa 10 ke tɔ̈ɔ̈u de wal kenë kë cï tek yic #3 (dpi). (I) Cɛɛth de jɔ̈k de kä cï kek gɔ̈t yiic (ITS) ke ɣän ke S. sclerotiorum cï kek tek yiic #3 acï kek ya looi në dhöl dït apɛi yenë käŋ thɔ̈ɔ̈ŋ ku thööŋë kek kenë kä cï kek tek yiic kaa 20 cï kek ya yök në akut de wël ke puɔ̈ɔ̈c de käŋ yiic (NCBI). Nambaa tɔ̈ nhial në thäm de määt yic aye të cïnë piny thiɔ̈ɔ̈ŋ thïn nyuɔɔth (%), ku nambaa tɔ̈ piiny në thäm de määt yic aye bɛ̈ɛ̈r de branch nyuɔɔth.
Në yekënë cök, ago tuanytuɛɛny ya ŋic, ke käŋ kaaŋuan cï kek yök ke S. sclerotiorum acï kek ya luɔ̈ɔ̈i agonë ​​mïïth ke Giza 3 ya tääu në ɣän ke ɣööt yiic, man ye thöŋ kenë wël cï kek lueel në Koch (Thiɛ̈ŋ de 1E). Na cɔk kä cï kek yök kedhiɛ ya tɔ̈ ke ye käm ku ka lëu bïk ya tuanytuɛɛny në tiim yiic (cv. Giza 3), ku ka ye käm ɣeer yök në ɣän tɔ̈ nhial kedhiɛ yiic (Thöŋ. 1F), në thɛɛr juëc yiic (Thöŋ. 1F), në thɛɛr juëc yiic (Thöŋ. 1H) në thɛɛr juëc yiic. thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r në käŋ kaa rou ke thëm lääu. Isolate 3 anɔŋ tuany dït apɛi (%) në tiim ë thäät yiic (24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, ku 76.7 ± 3.1 në nïn kaa 7, 14, ku 21 ë thök ë tuany, ë thäät yiic; Thura 1F).
Të yenë S. sclerotiorum yök thïn acï bɛ̈n ŋoot ke yök ke cï tɛ̈n cenë ye luɔɔi thïn në thɛɛr juëc yiic (ITS). Cɛɛth de kä cï röt looi në kaam de kä cï kek tek yiic #3 ku jɔl ya kä cï kek tek yiic kaa 20 acï thöŋ dït apɛi nyuɔɔth (>99%) në kɛmken. Alëu bï ya ŋic ke S. OR206374.1; 548 bp), ye tiim cɔl violet (Matthiola incana) cɔk thök, keek kedhie aye keek mat në akuut wääc yiic në nhom de tiim yiic (Thoŋ 1I). Kë yam cï tääu në NCBI yic ku cï cɔl “Kë cï yök në NCBI yic – cï YN-25 tek yic” (namba de yök de GenBank PV202792). Alëu bï tïŋ ke 3 yenë kee tɔ̈c ë tɔ̈c ë tɔ̈c ë tɔ̈c; ku na yïn ya, ke isolate kënë acï kuany bï ya puɔ̈ɔ̈c në käjuëc cï kek ya looi yiic.
Käk ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r (12.5, 25, 50, 75, 100 ku 125 mg/L) ë thɔ̈ɔ̈r ë thɔ̈ɔ̈r 3 acï thɔ̈ɔ̈ŋ në vitro. Aye ŋic ke L-ornithine ee tɔ̈ ke nɔŋ kë ye looi ku ye cil de S. Në thëm dït apɛi cï them (125 mg/L), L-ornithine acï thëm dït apɛi de dït de mycelium nyuɔɔth (99.62 ± 0.27%; Thura 2B), ye thöŋ ke thëm de thëm de thëm de thëm de thëm de thëm de thëm de thëm de thëm de thëm. (10 mg/L), ë thööŋ ë thööŋ ë thööŋ.
Thura 2. Në thëm de thëm de thëm de thëm de L-ornïthïne në thëm de thëm de thëm de thëm. (A) Thɔ̈ɔ̈ŋ de luɔɔi de käm ë thäät wääc yiic ke L-ornithine tënë S. (B, C) Tɛ̈n ë gël (%) ë dït de S. Kä thöŋ aye tɔ̈u ke ye kën thööŋë ± SD de käŋ kaa dhiëc ke kä pïr cï röt dhuɔ̈kpiny (n = 5). Athör wääc aye wuɔ̈ɔ̈c de thööŋ nyuɔɔth në kaam de töök (p < 0.05). (D, E) Cɛɛth de kä cï röt looi ke L-ornithin ku käm ye kek ɣaac wei cɔl Rizolex-T, në tök. Löŋ de thäm de dhukciëën de probit aye nyuɔɔth ke ye thäm maalak ril, ku kaam de gäm (95%) aye nyuɔɔth ke ye thäm thith cï gɔ̈l.
Në ye kënë yic, ke thööŋ de thööŋ de kä cï röt looi acï looi ku thööŋ de kä thöŋ kenë yen acï nyuɔɔth në Table 1 ku Thura 2D,E. Në wël lik yiic, ke ciin de thëm cï gam (y = 2.92x − 4.67) ku kä thiekiic thiääk kenë kek (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 ku p < 0.0001; Thura 2D) de L-ornithine acï thɔ̈ɔ̈ŋ keke kë cï juak në luɔɔi yic. Rïzölëx-T (y = 1,96x − 0,99, Kɔx & Snël R2 = 0,1242, Nägëlkerkë R2 = 0,1708 ku p < 0,0001) (Thöŋ 1).
IC50 ku IC99 (mg/l) de L-ornithine ku käk ë ɣɔɔc ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät.
Në thökde, L-ornithine (250 mg/L) acï dït apɛi ë dït de pïu ɣer ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë S. Në wël lik yiic, ke tuanytuɛɛny ke tiim cï kek ya gël ëke këc kek ya töök aye röt juak amääth (52,67 ± 1,53, 83,21 ± 2,61, ku 92,33 ± 3,06%), ku L-ornithine acï tuanytuɛɛny ya cɔk tɔ̈ piiny apɛi (%) në thëm de käŋ yiic kedhiɛ (81,5). 1.00, ku 26.36 ± 3.07) në nïn ka 7, 14, ku 21 ë nïn ë tɔ̈ɔ̈u (dpt), ë thäät yiic (Thöŋ 3A). Cït mɛn de, të cïnë tiim cï yök ke cï S. Rïzölëx-T fùngïsïdë (183,61 ± 7,71; Fig. 3B). Kë thöŋ kën acï tïŋ në thëm de rou yic.
Fig. 3. Kë ye rot looi në luɔɔi de L-ornithine në yïknhial de pïu ɣer cï riääk në pïu yiic ye bɛ̈n në ɣän ke pïu yiic. (A) Kë cë rɔt waar në tuany ë nhom ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë 250 mg/L L-ornïthïne. (B) Të tɔ̈ në thök de thök de tuany (AUDPC) de thök ë thök ë thök ë thök ë thök ë L-ornithine. Kä thöŋ aye tɔ̈u ke ye kën thööŋë ± SD de käŋ kaa dhiëc ke kä pïr cï röt dhuɔ̈kpiny (n = 5). Athör wääc aye thööŋ de kä wääc ke töök nyuɔɔth (p < 0.05).
Luɔɔi de 250 mg/L L-ornithine ee bɛ̈ɛ̈r de tim juak amääth (Thöŋ 4A), ciin de yïth ke tim (Thöŋ 4B), ku ciin de yïth ke tim (Thöŋ 4C) në nïn kaa 42 yiic. Ku ë tɔ̈ ke ye kën ye cɔl Rizolex-T (50 mg/L) yenë käŋ ɣaac wei anɔŋ kë dït apɛi ye looi në käke mïïth cï kek kueen yiic, ke luɔɔi de 250 mg/L L-ornithine ee naŋ kë dït apɛi ye looi të thööŋë yen kenë kä cïï kek ye tɔ̈ɔ̈u (Thöŋ. 4A–C). Në baŋ dɛ̈t, L-ornithine ë tɔ̈ɔ̈u acïn kë dït ë yök në tɔ̈u de pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu (Thöŋ 4D) ku pïu ë pïu ë pïu (Thöŋ 4E), ku ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu ë pïu. gël pösïtïf (0,46 ± 0,02 mg/g fr wt; fïg. 4F). Në këriɛ̈ɛ̈c ëbën yic, ke kä cï kek yök ëtënë aye nyuɔɔth ke L-ornithine acie tɔ̈ ke ye kërac tënë tiim cï kek ya tɔ̈ɔ̈u ku ka lëu bïk cilden ya cɔk dït.
Fig. 4. Kë ye rot looi në luɔɔi de L-ornithine në dït de kä ye röt looi ku kä ye röt looi në pïu yiic në yïïth ke rap yiic cï tuaany de Sclerotinia sclerotiorum yök në ɣän ke ɣön ë pïu yiic. (A) Bɛ̈r de tim (cm), (B) Ciin de yïth ke tim tökic, (C) Ciin de yïth ke tim tökic, (D) Kë tɔ̈ thïn në tiim yiic (mg g-1 fr wt), (E) Kë tɔ̈ thïn në tiim yiic b (mg g-1 fr wt), (F) Kë tɔ̈ thïn ëbɛ̈n (mg g-1 fr wt). Kä ye thɔ̈ɔ̈ŋ aye thööŋ ± SD de käŋ kaa dhiëc ke kä pïr cï röt dhuɔ̈kpiny (n = 5). Athör wääc aye thööŋ de thööŋ de thööŋ nyuɔɔth në kaam de töök (p < 0.05).
Në thɛɛr ke tɔ̈c de kä ye röt looi ke aliir (ROS; ye lueel ke ye aliir ye rot looi [H2O2]) ku kä ye röt looi ke cïn kë ye yök thïn (ye lueel ke ye aliir ye rot looi [O2•−]) acï nyuɔɔth lɔnadɛ̈ ke luɔɔi de L-ornithine (250 mg/L) acï tɔ̈ɔ̈u de H2O (52000) cɔk tɔ̈u piiny apɛi. nmol.g−1 FW; Thura 5A) ku O2•− (32,69 ± 8,56 nmol.g−1 FW; Thura 5B) thööŋë keek kenë mɛ̈ɛ̈të yic de tiim cï tuaany dɔm kedhiɛ (173,31 ± 12,06 ku 149,35 ± 7,94 nmol. mg/L ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë thäät ë 72 h. Kä juëc ke H2O2 ku O2•− cï keek määt yiic në hpt cök (Thöŋ 5A, B). Cïmën de, thëm de TCA acï nyuɔɔth lɔn ye tiim ë thäät cï yök në S. Ku na yïn ya, ke luɔɔi de L-ornithine ee pïu cɔk tɔ̈ piiny apɛi cïmën cenë ye nyuɔɔth në thök de MDA në tiim cï kek ya töök yiic (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt).
Fig. 5. Kë ye rot looi në luɔɔi de L-ornithine yic në kä ye kɔc nyuɔɔth ke kä ye röt looi në pïu yiic ku jɔl ya kä ye röt gël në pïu yiic në yïth ke bean yiic cï kek ya yök në S. sclerotiorum në thaa 72 yiic të cïnë kek ya yök në ɣän ke tiim yiic. (A) Yïdrögën përöxïdë (H2O2; nmöl g-1 FW) tën 72 hpt, (B) kä cï liääp thïn (O2•-; nmöl g-1 FW) tën 72 hpt, (C) mölöndïaldëhïdë (MDA; nmol g-1 FW) tën 72 hpt, (D) kë cï liääp abɛ̈n (D) kë cï liääp ëbɛ̈n (Fg-1 FW) (E) ciin de kä ye lac liääp (mg RE g-1 FW) në 72 hpt, (F) ciin de kä ye lac liääp (mg g-1 FW) në 72 hpt, ku (G) kä tɔ̈ në proline yic (mg g-1 FW) në 72 hpt. Kä thöŋ aye tɔ̈u në nyin de thööŋ ± thööŋ de thööŋ (thööŋ ± SD) de 5 kä ye röt dhuɔ̈kpiny ke kä pïr (n = 5). Athör wääc aye thööŋ de thööŋ de thööŋ nyuɔɔth në kaam de töök (p < 0.05).